植物学通报
植物學通報
식물학통보
CHINESE BULLETIN OF BOTANY
2008年
3期
322-331
,共10页
农杆菌介导的遗传转化%成熟胚诱导的愈伤组织%水稻
農桿菌介導的遺傳轉化%成熟胚誘導的愈傷組織%水稻
농간균개도적유전전화%성숙배유도적유상조직%수도
以成熟胚愈伤组织为材料的农杆菌介导水稻转化法虽已建立,但转化频率仍有待提高.本文以粳稻(Oryza sativa)品种(中花10号和中花11号)的成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,对组织培养体系及影响遗传转化的因素进行优化,建立了一套改进的农杆菌介导的水稻高效遗传转化系统.农杆菌菌株为EHA105,质粒载体是pUN1301/OsRAA1,其中含有标记基因GUS和筛选基因HPT.愈伤组织诱导培养基为NBD2(NB+2 mg·L-12,4-D),继代培养基为NBD0.5,预分化与分化培养基为RE1(MS+1 mg·L-16-BA+0.25 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT)和RE2(MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT).另外,还分析了影响T-DNA转移的多种因素,如外植体种类、愈伤组织预培养基和愈伤组织继代次数等.采用优化的转化程序,水稻愈伤组织转化率和植株转化率可达70%以上.
以成熟胚愈傷組織為材料的農桿菌介導水稻轉化法雖已建立,但轉化頻率仍有待提高.本文以粳稻(Oryza sativa)品種(中花10號和中花11號)的成熟胚誘導的愈傷組織為受體材料,對組織培養體繫及影響遺傳轉化的因素進行優化,建立瞭一套改進的農桿菌介導的水稻高效遺傳轉化繫統.農桿菌菌株為EHA105,質粒載體是pUN1301/OsRAA1,其中含有標記基因GUS和篩選基因HPT.愈傷組織誘導培養基為NBD2(NB+2 mg·L-12,4-D),繼代培養基為NBD0.5,預分化與分化培養基為RE1(MS+1 mg·L-16-BA+0.25 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT)和RE2(MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT).另外,還分析瞭影響T-DNA轉移的多種因素,如外植體種類、愈傷組織預培養基和愈傷組織繼代次數等.採用優化的轉化程序,水稻愈傷組織轉化率和植株轉化率可達70%以上.
이성숙배유상조직위재료적농간균개도수도전화법수이건립,단전화빈솔잉유대제고.본문이갱도(Oryza sativa)품충(중화10호화중화11호)적성숙배유도적유상조직위수체재료,대조직배양체계급영향유전전화적인소진행우화,건립료일투개진적농간균개도적수도고효유전전화계통.농간균균주위EHA105,질립재체시pUN1301/OsRAA1,기중함유표기기인GUS화사선기인HPT.유상조직유도배양기위NBD2(NB+2 mg·L-12,4-D),계대배양기위NBD0.5,예분화여분화배양기위RE1(MS+1 mg·L-16-BA+0.25 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT)화RE2(MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1KT+0.2 mg·L-1ZT).령외,환분석료영향T-DNA전이적다충인소,여외식체충류、유상조직예배양기화유상조직계대차수등.채용우화적전화정서,수도유상조직전화솔화식주전화솔가체70%이상.
