中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
1期
206-208
,共3页
邹立林%郑晓群%左江成%王震%季敬璋%吕建新
鄒立林%鄭曉群%左江成%王震%季敬璋%呂建新
추립림%정효군%좌강성%왕진%계경장%려건신
白细胞介素6%RNA,信使%逆转录聚合酶链反应%TaqMan-MGB技术%牛膝多糖
白細胞介素6%RNA,信使%逆轉錄聚閤酶鏈反應%TaqMan-MGB技術%牛膝多糖
백세포개소6%RNA,신사%역전록취합매련반응%TaqMan-MGB기술%우슬다당
目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达.方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α.提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品.建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法.(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达.结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上.(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好.(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高.结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA.
目的:建立TaqMan-MGB技術實時定量檢測人IL-6 mRNA的方法,併用于檢測人外週血單箇覈細胞在牛膝多糖誘導下IL-6 mRNA的錶達.方法:(1)抽取人外週靜脈血,EDTA抗凝,用淋巴細胞分離液分離外週血單箇覈細胞,用Trizol裂解液提取總RNA,將總RNA逆轉錄為cDNA,PCR擴增IL-6後純化PCR產物,與pMD 18-T載體進行連接,轉化宿主菌DH-5α.提取重組質粒DNA,作為實時熒光定量檢測的標準品.建立TaqMan-MGB技術實時定量檢測IL-6 mRNA的方法.(2)終濃度分彆為0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外週血單箇覈細胞,定量檢測IL-6 mRNA的錶達.結果:(1)酶切分析、PCR擴增以及測序結果均證實IL-6 cDNA成功重組到pMD 18-T載體上.(2)TaqMan-MGB技術檢測IL-6 mRNA線性範圍廣;靈敏度高;特異性好;重複性好.(3)牛膝多糖作用于人外週血單箇覈細胞後IL-6 mRNA錶達增高.結論:TaqMan-MGB技術能較為精確地定量IL-6 mRNA.
목적:건립TaqMan-MGB기술실시정량검측인IL-6 mRNA적방법,병용우검측인외주혈단개핵세포재우슬다당유도하IL-6 mRNA적표체.방법:(1)추취인외주정맥혈,EDTA항응,용림파세포분리액분리외주혈단개핵세포,용Trizol렬해액제취총RNA,장총RNA역전록위cDNA,PCR확증IL-6후순화PCR산물,여pMD 18-T재체진행련접,전화숙주균DH-5α.제취중조질립DNA,작위실시형광정량검측적표준품.건립TaqMan-MGB기술실시정량검측IL-6 mRNA적방법.(2)종농도분별위0、100、200、400、800화1 600 mg/L적우슬다당작용우인외주혈단개핵세포,정량검측IL-6 mRNA적표체.결과:(1)매절분석、PCR확증이급측서결과균증실IL-6 cDNA성공중조도pMD 18-T재체상.(2)TaqMan-MGB기술검측IL-6 mRNA선성범위엄;령민도고;특이성호;중복성호.(3)우슬다당작용우인외주혈단개핵세포후IL-6 mRNA표체증고.결론:TaqMan-MGB기술능교위정학지정량IL-6 mRNA.
