江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2008年
2期
173-175
,共3页
李红兵%陈明%朱学文%汪莉萍%葛国洪%李秀华
李紅兵%陳明%硃學文%汪莉萍%葛國洪%李秀華
리홍병%진명%주학문%왕리평%갈국홍%리수화
聚合酶链反应%T细胞受体重排切除环%标准曲线%质粒
聚閤酶鏈反應%T細胞受體重排切除環%標準麯線%質粒
취합매련반응%T세포수체중배절제배%표준곡선%질립
目的 构建荧光定量PCR检测T细胞受体重排切除环(TRECs)的标准品质粒和标准曲线.方法 对TCRδ基因进行序列分析,设计一对引物和探针.提取正常人外周血单个核细胞中的DNA,经普通PCR扩增,产物纯化后与pUCM-T载体连接并转化入大肠杆菌DH5α,筛选得到重组成功的质粒.结果 重组质粒测序后显示目的片段序列正确,表明TRECs基因片段成功克隆.以103～107 copies/ml不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系(r=-0.998,P＜0.01).结论 所构建的TRECs标准品特异性和线性关系较好.
目的 構建熒光定量PCR檢測T細胞受體重排切除環(TRECs)的標準品質粒和標準麯線.方法 對TCRδ基因進行序列分析,設計一對引物和探針.提取正常人外週血單箇覈細胞中的DNA,經普通PCR擴增,產物純化後與pUCM-T載體連接併轉化入大腸桿菌DH5α,篩選得到重組成功的質粒.結果 重組質粒測序後顯示目的片段序列正確,錶明TRECs基因片段成功剋隆.以103～107 copies/ml不同稀釋水平的標準品進行熒光定量PCR擴增後,統計學分析顯示標準品濃度的對數與Ct值之間存在良好的線性關繫(r=-0.998,P＜0.01).結論 所構建的TRECs標準品特異性和線性關繫較好.
목적 구건형광정량PCR검측T세포수체중배절제배(TRECs)적표준품질립화표준곡선.방법 대TCRδ기인진행서렬분석,설계일대인물화탐침.제취정상인외주혈단개핵세포중적DNA,경보통PCR확증,산물순화후여pUCM-T재체련접병전화입대장간균DH5α,사선득도중조성공적질립.결과 중조질립측서후현시목적편단서렬정학,표명TRECs기인편단성공극륭.이103～107 copies/ml불동희석수평적표준품진행형광정량PCR확증후,통계학분석현시표준품농도적대수여Ct치지간존재량호적선성관계(r=-0.998,P＜0.01).결론 소구건적TRECs표준품특이성화선성관계교호.
