第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
1期
35-38
,共4页
潘光栋%严律南%王新平%杨家印%夏庆杰%闫乃红%陈清英%张发强
潘光棟%嚴律南%王新平%楊傢印%夏慶傑%閆迺紅%陳清英%張髮彊
반광동%엄률남%왕신평%양가인%하경걸%염내홍%진청영%장발강
肝细胞癌%多药耐药%RNA干扰
肝細胞癌%多藥耐藥%RNA榦擾
간세포암%다약내약%RNA간우
目的 筛选高效dsRNA/mdr1,以备研究RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药之用.方法 首先根据siRNA设计原则,以多药耐药基因(mdr1)为靶基因,设计并选择4～5条siRNA/mdr1,经BLAST后体外转录法合成dsRNA/mdr1,用Oligofectamine试剂分别转染HepG2/mdr1,然后从mRNA、蛋白(P-gp)表达水平和细胞功能变化评价HepG2/mdr1耐药性被逆转的程度,比较各个dsRNA/mdr1的逆转效率,筛选出有效的siRNA/mdr1.结果 成功合成5条dsRNA/mdr1(其中1条为阴性对照),dsRNA/mdr1-4 mRNA表达(18.73±1.33)%、蛋白表达变化(79.1±1.6)%～(16.8±0.4)%与其他各组细胞比较,有显著性差异;细胞内柔红霉素(DNR)累积量也较其他组明显增加(平均荧光强度79.58,阳性率84.25%,P＜0.05).结论 体外转录法结合脂质体转染适用于筛选高效siRNA,肯定了siRNA干扰序列能够有效阻抑mdr1基因编码蛋白p170的功能.
目的 篩選高效dsRNA/mdr1,以備研究RNA榦擾逆轉肝細胞癌多藥耐藥之用.方法 首先根據siRNA設計原則,以多藥耐藥基因(mdr1)為靶基因,設計併選擇4～5條siRNA/mdr1,經BLAST後體外轉錄法閤成dsRNA/mdr1,用Oligofectamine試劑分彆轉染HepG2/mdr1,然後從mRNA、蛋白(P-gp)錶達水平和細胞功能變化評價HepG2/mdr1耐藥性被逆轉的程度,比較各箇dsRNA/mdr1的逆轉效率,篩選齣有效的siRNA/mdr1.結果 成功閤成5條dsRNA/mdr1(其中1條為陰性對照),dsRNA/mdr1-4 mRNA錶達(18.73±1.33)%、蛋白錶達變化(79.1±1.6)%～(16.8±0.4)%與其他各組細胞比較,有顯著性差異;細胞內柔紅黴素(DNR)纍積量也較其他組明顯增加(平均熒光彊度79.58,暘性率84.25%,P＜0.05).結論 體外轉錄法結閤脂質體轉染適用于篩選高效siRNA,肯定瞭siRNA榦擾序列能夠有效阻抑mdr1基因編碼蛋白p170的功能.
목적 사선고효dsRNA/mdr1,이비연구RNA간우역전간세포암다약내약지용.방법 수선근거siRNA설계원칙,이다약내약기인(mdr1)위파기인,설계병선택4～5조siRNA/mdr1,경BLAST후체외전록법합성dsRNA/mdr1,용Oligofectamine시제분별전염HepG2/mdr1,연후종mRNA、단백(P-gp)표체수평화세포공능변화평개HepG2/mdr1내약성피역전적정도,비교각개dsRNA/mdr1적역전효솔,사선출유효적siRNA/mdr1.결과 성공합성5조dsRNA/mdr1(기중1조위음성대조),dsRNA/mdr1-4 mRNA표체(18.73±1.33)%、단백표체변화(79.1±1.6)%～(16.8±0.4)%여기타각조세포비교,유현저성차이;세포내유홍매소(DNR)루적량야교기타조명현증가(평균형광강도79.58,양성솔84.25%,P＜0.05).결론 체외전록법결합지질체전염괄용우사선고효siRNA,긍정료siRNA간우서렬능구유효조억mdr1기인편마단백p170적공능.
