CAJ | 학술논문

目的:在构建巨噬细胞特异表达且带有染色质隔离子的人基质金属蛋白酶-12(hMMP-12)转基因表达栽体的基础上构建hMMP-12转基因兔动物模型.方法:首先通过RT-PCR方法扩增hMMP-12基因,产物亚克隆到pGEM-T栽体,测序后获得pGEM-T-hMMP-12,然后利用pJC13构建带有染色质隔离子和清道夫受体A增强子、启动子和人生长激素尾的亚克隆pJC13-SR,再利用pGEM-T-hMMP-12和pJC13-SR重组质粒,构建巨噬细胞特异性的转基因表达载体pJC13-SR-hMMP-12,最后pJC13-SR-hMMP-12表达载体线性化,显微注射家免受精卵制备转基因兔,并进行PCR扩增及Southem Blot转基因效果分析鉴定.结果:(1)通过DNA测序和限制性核酸内切酶酶切鉴定证实,hMMP-12成功克隆到所需表达载体中;(2)转基因后获得仔兔36只,以PCR检测结果计算,转基因总效率为1.4%～3-4%,整合率为20%～50%;以Southern Blot检测结果计算,转基因总效率为0.5%～2.2%,整合率为13%～17%.结论:转基因表达栽体的成功构建,为hMMP-12转基因兔动物模型的构建和研究MMP-12在动脉粥样硬化的形成和发展中的作用机制奠定了基础.
목적:재구건거서세포특이표체차대유염색질격리자적인기질금속단백매-12(hMMP-12)전기인표체재체적기출상구건hMMP-12전기인토동물모형.방법:수선통과RT-PCR방법확증hMMP-12기인,산물아극륭도pGEM-T재체,측서후획득pGEM-T-hMMP-12,연후이용pJC13구건대유염색질격리자화청도부수체A증강자、계동자화인생장격소미적아극륭pJC13-SR,재이용pGEM-T-hMMP-12화pJC13-SR중조질립,구건거서세포특이성적전기인표체재체pJC13-SR-hMMP-12,최후pJC13-SR-hMMP-12표체재체선성화,현미주사가면수정란제비전기인토,병진행PCR확증급Southem Blot전기인효과분석감정.결과:(1)통과DNA측서화한제성핵산내절매매절감정증실,hMMP-12성공극륭도소수표체재체중;(2)전기인후획득자토36지,이PCR검측결과계산,전기인총효솔위1.4%～3-4%,정합솔위20%～50%;이Southern Blot검측결과계산,전기인총효솔위0.5%～2.2%,정합솔위13%～17%.결론:전기인표체재체적성공구건,위hMMP-12전기인토동물모형적구건화연구MMP-12재동맥죽양경화적형성화발전중적작용궤제전정료기출.