中国耳鼻咽喉头颈外科
中國耳鼻嚥喉頭頸外科
중국이비인후두경외과
CHINESE ARCHIVER OF OTOLARYNGOLOGY-HEAD AND NECK SURGERY
2007年
11期
659-661
,共3页
滕博%辛丁%文连姬%王君影%崔树勋%金春顺
滕博%辛丁%文連姬%王君影%崔樹勛%金春順
등박%신정%문련희%왕군영%최수훈%금춘순
DNA,催化性%真核细胞起始因子4E%基因疗法%喉肿瘤
DNA,催化性%真覈細胞起始因子4E%基因療法%喉腫瘤
DNA,최화성%진핵세포기시인자4E%기인요법%후종류
目的 研究特异性脱氧核酶(10-23DNAzyme)对喉癌真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF4E)基因mRNA的体外切割作用.方法 设计合成针对原癌基因eIF4EmRNA编码区的1102、1289、1226位点的3个10-23DNAzyme-eIF4E,用内切酶Xhol将含有eIF4E基因mRNA的pGEM7zf+eIF4E质粒消化成线性.以此为模板体外转录出用[α-32P]UTP标记的靶eIF4E基因编码区mRNA.在37℃,pH 7.5,Mg2+离子50 mmol/L条件下,分别与3个10-23DNAzyme-eIF4E(1 μmol/L)混合进行切割反应,并比较不同Mg2+离子浓度下酶对靶mRNA的切割活性.反应产物在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离并行放射自显影,应用凝胶成像分析仪评价酶的切割效率.结果 在设定条件下,3个10-23DNAzyme-eIF4E对eIF4E基因mRNA均有切割活性,且随着Mg2+浓度越高,酶的切割活性增强.结论 3个10-23DNAzyme-eIF4E能有效切割eIF4E基因编码区mRNA,且切割效率与Mg2+浓度有关.
目的 研究特異性脫氧覈酶(10-23DNAzyme)對喉癌真覈細胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF4E)基因mRNA的體外切割作用.方法 設計閤成針對原癌基因eIF4EmRNA編碼區的1102、1289、1226位點的3箇10-23DNAzyme-eIF4E,用內切酶Xhol將含有eIF4E基因mRNA的pGEM7zf+eIF4E質粒消化成線性.以此為模闆體外轉錄齣用[α-32P]UTP標記的靶eIF4E基因編碼區mRNA.在37℃,pH 7.5,Mg2+離子50 mmol/L條件下,分彆與3箇10-23DNAzyme-eIF4E(1 μmol/L)混閤進行切割反應,併比較不同Mg2+離子濃度下酶對靶mRNA的切割活性.反應產物在8%變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離併行放射自顯影,應用凝膠成像分析儀評價酶的切割效率.結果 在設定條件下,3箇10-23DNAzyme-eIF4E對eIF4E基因mRNA均有切割活性,且隨著Mg2+濃度越高,酶的切割活性增彊.結論 3箇10-23DNAzyme-eIF4E能有效切割eIF4E基因編碼區mRNA,且切割效率與Mg2+濃度有關.
목적 연구특이성탈양핵매(10-23DNAzyme)대후암진핵세포기시인자4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF4E)기인mRNA적체외절할작용.방법 설계합성침대원암기인eIF4EmRNA편마구적1102、1289、1226위점적3개10-23DNAzyme-eIF4E,용내절매Xhol장함유eIF4E기인mRNA적pGEM7zf+eIF4E질립소화성선성.이차위모판체외전록출용[α-32P]UTP표기적파eIF4E기인편마구mRNA.재37℃,pH 7.5,Mg2+리자50 mmol/L조건하,분별여3개10-23DNAzyme-eIF4E(1 μmol/L)혼합진행절할반응,병비교불동Mg2+리자농도하매대파mRNA적절할활성.반응산물재8%변성취병희선알응효상전영분리병행방사자현영,응용응효성상분석의평개매적절할효솔.결과 재설정조건하,3개10-23DNAzyme-eIF4E대eIF4E기인mRNA균유절할활성,차수착Mg2+농도월고,매적절할활성증강.결론 3개10-23DNAzyme-eIF4E능유효절할eIF4E기인편마구mRNA,차절할효솔여Mg2+농도유관.
