中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2007年
5期
397-400
,共4页
李文姝%朱珊丽%王鹏飞%张丽芳%闵太善%黄伟达
李文姝%硃珊麗%王鵬飛%張麗芳%閔太善%黃偉達
리문주%주산려%왕붕비%장려방%민태선%황위체
弓形虫%重组嵌合抗原%ROP2-P30%免疫血清
弓形蟲%重組嵌閤抗原%ROP2-P30%免疫血清
궁형충%중조감합항원%ROP2-P30%면역혈청
目的 制备与鉴定弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)重组嵌合抗原的特异性免疫兔血清.方法 将已构建的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,分离上清液和包涵体,包涵体用2mol/L和4mol/L尿素梯度洗涤去杂蛋白,最后用8mol/L尿素溶解洗涤后的包涵体,进行十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),割胶回收目的蛋白,研磨成乳浊状后以背部多点注射免疫大白耳兔,制备免疫兔血清,以免疫扩散试验检测生成的特异性抗体,间接ELISA法测定免疫血清的抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析免疫血清的抗体特异性.结果 免疫结束后,通过对流免疫扩散试验检测到了针对rROP2-P30的特异性抗体,间接ELISA法测定到其抗体滴度最高可达1∶12 800,Western blotting分析结果表明,此免疫血清与可溶性的重组蛋白、包涵体形式的重组蛋白均能特异性结合.结论 得到了针对rROP2-P30重组嵌合抗原的特异性免疫血清.
目的 製備與鑒定弓形蟲棒狀體蛋白2(ROP2)和膜錶麵蛋白1(P30)重組嵌閤抗原的特異性免疫兔血清.方法 將已構建的重組質粒pET28b/ROP2-P30轉化大腸埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達後,分離上清液和包涵體,包涵體用2mol/L和4mol/L尿素梯度洗滌去雜蛋白,最後用8mol/L尿素溶解洗滌後的包涵體,進行十二烷基磺痠鈉-聚丙稀酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),割膠迴收目的蛋白,研磨成乳濁狀後以揹部多點註射免疫大白耳兔,製備免疫兔血清,以免疫擴散試驗檢測生成的特異性抗體,間接ELISA法測定免疫血清的抗體效價,蛋白質印跡(Western blotting)分析免疫血清的抗體特異性.結果 免疫結束後,通過對流免疫擴散試驗檢測到瞭針對rROP2-P30的特異性抗體,間接ELISA法測定到其抗體滴度最高可達1∶12 800,Western blotting分析結果錶明,此免疫血清與可溶性的重組蛋白、包涵體形式的重組蛋白均能特異性結閤.結論 得到瞭針對rROP2-P30重組嵌閤抗原的特異性免疫血清.
목적 제비여감정궁형충봉상체단백2(ROP2)화막표면단백1(P30)중조감합항원적특이성면역토혈청.방법 장이구건적중조질립pET28b/ROP2-P30전화대장애희균BL21-Codon Plus(DE3)-RIL균주,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체후,분리상청액화포함체,포함체용2mol/L화4mol/L뇨소제도세조거잡단백,최후용8mol/L뇨소용해세조후적포함체,진행십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE),할효회수목적단백,연마성유탁상후이배부다점주사면역대백이토,제비면역토혈청,이면역확산시험검측생성적특이성항체,간접ELISA법측정면역혈청적항체효개,단백질인적(Western blotting)분석면역혈청적항체특이성.결과 면역결속후,통과대류면역확산시험검측도료침대rROP2-P30적특이성항체,간접ELISA법측정도기항체적도최고가체1∶12 800,Western blotting분석결과표명,차면역혈청여가용성적중조단백、포함체형식적중조단백균능특이성결합.결론 득도료침대rROP2-P30중조감합항원적특이성면역혈청.
