黑龙江畜牧兽医
黑龍江畜牧獸醫
흑룡강축목수의
HEILONGJIANG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
2007年
12期
12-16
,共5页
阳玉梅%郑小龙%黄维义%石云良%代华龙%张为宇
暘玉梅%鄭小龍%黃維義%石雲良%代華龍%張為宇
양옥매%정소룡%황유의%석운량%대화룡%장위우
沼泽型水牛%单核细胞%IL-10%IFN-γ%克隆%测序
沼澤型水牛%單覈細胞%IL-10%IFN-γ%剋隆%測序
소택형수우%단핵세포%IL-10%IFN-γ%극륭%측서
将本地沼泽型成年水牛外周血单核细胞(PBMC)在刀豆素A(ConA)的刺激下体外培养,提取培养的单核细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增水牛白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ),并克隆到pMD18-T载体上,用EcoR I和HindⅢ双酶切鉴定筛选阳性克隆,然后进行测序.序列分析结果显示:IL-10开放阅读框(ORF)由536个核苷酸组成,共编码178个氨基酸;在核苷酸水平上与印度水牛、牛、绵羊、猪、马、人和鼠的IL-10基因的同源性为75.9%～99.6%;氨基酸的同源性为74.2%～100%.IFN-γ的ORF由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸;在核苷酸水平上与印度水牛、牛、绵羊、猪、马、人和鼠的IFN-γ基因的同源性为60.7%～99.6%;氨基酸的同源性为40.6%～100%.
將本地沼澤型成年水牛外週血單覈細胞(PBMC)在刀豆素A(ConA)的刺激下體外培養,提取培養的單覈細胞總RNA,應用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術擴增水牛白細胞介素-10(IL-10)和榦擾素-γ(IFN-γ),併剋隆到pMD18-T載體上,用EcoR I和HindⅢ雙酶切鑒定篩選暘性剋隆,然後進行測序.序列分析結果顯示:IL-10開放閱讀框(ORF)由536箇覈苷痠組成,共編碼178箇氨基痠;在覈苷痠水平上與印度水牛、牛、綿羊、豬、馬、人和鼠的IL-10基因的同源性為75.9%～99.6%;氨基痠的同源性為74.2%～100%.IFN-γ的ORF由501箇覈苷痠組成,共編碼166箇氨基痠;在覈苷痠水平上與印度水牛、牛、綿羊、豬、馬、人和鼠的IFN-γ基因的同源性為60.7%～99.6%;氨基痠的同源性為40.6%～100%.
장본지소택형성년수우외주혈단핵세포(PBMC)재도두소A(ConA)적자격하체외배양,제취배양적단핵세포총RNA,응용역전록취합매련식반응(RT-PCR)기술확증수우백세포개소-10(IL-10)화간우소-γ(IFN-γ),병극륭도pMD18-T재체상,용EcoR I화HindⅢ쌍매절감정사선양성극륭,연후진행측서.서렬분석결과현시:IL-10개방열독광(ORF)유536개핵감산조성,공편마178개안기산;재핵감산수평상여인도수우、우、면양、저、마、인화서적IL-10기인적동원성위75.9%～99.6%;안기산적동원성위74.2%～100%.IFN-γ적ORF유501개핵감산조성,공편마166개안기산;재핵감산수평상여인도수우、우、면양、저、마、인화서적IFN-γ기인적동원성위60.7%～99.6%;안기산적동원성위40.6%～100%.
