生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
753-755
,共3页
于芳%金宁一%李昌%刘玉生%佟敬山%金洪涛
于芳%金寧一%李昌%劉玉生%佟敬山%金洪濤
우방%금저일%리창%류옥생%동경산%금홍도
白喉毒素%基因克隆%免疫毒素%原核表达
白喉毒素%基因剋隆%免疫毒素%原覈錶達
백후독소%기인극륭%면역독소%원핵표체
目的:构建重组DTA-hS120融合基因表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:通过PCR扩增,获得只含白喉毒素(DT)活性部位(DTA)的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定.结果:酶切及DNA序列测定鉴定质粒构建正确;SDS-PAGE和Western印迹分析证实,可表达出相对分子质量为54 000的融合蛋白,与DTA-hS120融合蛋白的分子量一致;经凝胶成像分析,其表达量约占菌体总蛋白的23%,表达形式主要为包涵体.结论:构建了DTA-hS120重组表达质粒,并获得了高效表达,为进一步研究抗HIV-1治疗药物奠定了基础.
目的:構建重組DTA-hS120融閤基因錶達載體,併誘導其在大腸桿菌中錶達.方法:通過PCR擴增,穫得隻含白喉毒素(DT)活性部位(DTA)的基因片段,將其剋隆入原覈錶達載體pET-28a,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE和Western印跡分析鑒定.結果:酶切及DNA序列測定鑒定質粒構建正確;SDS-PAGE和Western印跡分析證實,可錶達齣相對分子質量為54 000的融閤蛋白,與DTA-hS120融閤蛋白的分子量一緻;經凝膠成像分析,其錶達量約佔菌體總蛋白的23%,錶達形式主要為包涵體.結論:構建瞭DTA-hS120重組錶達質粒,併穫得瞭高效錶達,為進一步研究抗HIV-1治療藥物奠定瞭基礎.
목적:구건중조DTA-hS120융합기인표체재체,병유도기재대장간균중표체.방법:통과PCR확증,획득지함백후독소(DT)활성부위(DTA)적기인편단,장기극륭입원핵표체재체pET-28a,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체,경SDS-PAGE화Western인적분석감정.결과:매절급DNA서렬측정감정질립구건정학;SDS-PAGE화Western인적분석증실,가표체출상대분자질량위54 000적융합단백,여DTA-hS120융합단백적분자량일치;경응효성상분석,기표체량약점균체총단백적23%,표체형식주요위포함체.결론:구건료DTA-hS120중조표체질립,병획득료고효표체,위진일보연구항HIV-1치료약물전정료기출.
