CAJ | 학술논문

目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据.方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内胚层样END-2细胞条件培养液共培养联合诱导ESCs向心肌细胞分化.以自然分化为对照组.激光共聚焦显微技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.用Annexin V/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的凋亡情况.结果:EBs经TGF-β1诱导后,有(43.00±2.08)%的拟胚体出现自发节律性收缩,表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构,尤其是联合TGF-β1和END-2细胞条件培养液诱导,自发性收缩的拟胚体高达(88.00±1.42)%(P＜0.01),收缩区域较大且拥有较成熟的心肌样结构.然而自然分化组发生自发节律性收缩的拟胚体只有(12.00±1.53)%.经2种诱导条件诱导后,检测两者的凋亡率分别为(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P＜0.05).结论:联合TGF-β1和内脏内胚层样END-2细胞条件培养液对心肌细胞分化有较高的诱导率,两者发挥协同诱导作用,可能机制是直接诱导ESCs分化或促进不向心肌细胞分化的ESCs凋亡.
목적:탐토체외유도배태간세포(ESCs)향심기세포분화과정중분화여조망적관계,위우화조직공정적충자세포제공의거.방법:선장ESCs현부배양형성2-3 d의배체(embryoid bodies,EBs),재향배양액중첨가전화생장인자-β1(TGF-β1),이급여내장내배층양END-2세포조건배양액공배양연합유도ESCs향심기세포분화.이자연분화위대조조.격광공취초현미기술검측심기세포특이성기개단백T(TnT)적표체,투사전경관찰분화심기세포적초미결구.용Annexin V/PI쌍염후,재류식세포의상검측ESCs분화과정중적조망정황.결과:EBs경TGF-β1유도후,유(43.00±2.08)%적의배체출현자발절률성수축,표체심기세포특이성단백TnT,이급관찰도심기양초미결구,우기시연합TGF-β1화END-2세포조건배양액유도,자발성수축적의배체고체(88.00±1.42)%(P＜0.01),수축구역교대차옹유교성숙적심기양결구.연이자연분화조발생자발절률성수축적의배체지유(12.00±1.53)%.경2충유도조건유도후,검측량자적조망솔분별위(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P＜0.05).결론:연합TGF-β1화내장내배층양END-2세포조건배양액대심기세포분화유교고적유도솔,량자발휘협동유도작용,가능궤제시직접유도ESCs분화혹촉진불향심기세포분화적ESCs조망.