CAJ | 학술논문

目的:克隆血管内皮生长因子C(Vascular Endothelial Growth Factor C)功能片段的cDNA,构建人VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用.方法:根据人VEGF-C cDNA序列,设计合成二对特异性引物,第一对5'端含有EcoR Ⅰ及第二对3'端含有Xho Ⅰ酶切位点.运用RT-PCR法克隆人MDA-MB231中的VEGF-C cDNA部分编码序列(CDS);经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5α中扩增,纯化.通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定.结果:用RT-PCR克隆到VEGF-C cDNA部分CDS;PCR和双酶切鉴定阳性重组子,显示有人VEGF-C cDNA编码序列,基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF-C序列正确.结论:从富含VEGF-C的人MDA-MB231细胞系中克隆得到的VEGF-C基因功能片段cDNA,成功构建了人真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C.
목적:극륭혈관내피생장인자C(Vascular Endothelial Growth Factor C)공능편단적cDNA,구건인VEGF-C기인적진핵표체재체,이편진일보연구VEGF-C재궁경암중표체적의의급재림파관생장급전이중적작용.방법:근거인VEGF-C cDNA서렬,설계합성이대특이성인물,제일대5'단함유EcoR Ⅰ급제이대3'단함유Xho Ⅰ매절위점.운용RT-PCR법극륭인MDA-MB231중적VEGF-C cDNA부분편마서렬(CDS);경쌍매절후장기극륭입진핵표체재체pcDNA3.1(+),중조질립재처우감수태적대장간균DH5α중확증,순화.통과PCR화쌍매절감정양성중조자급진행기인서렬적측정.결과:용RT-PCR극륭도VEGF-C cDNA부분CDS;PCR화쌍매절감정양성중조자,현시유인VEGF-C cDNA편마서렬,기인서렬측정현시중조질립상삽입적인VEGF-C서렬정학.결론:종부함VEGF-C적인MDA-MB231세포계중극륭득도적VEGF-C기인공능편단cDNA,성공구건료인진핵표체재체pcDNA3.1(+)/VEGF-C.