细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
3期
290-292
,共3页
杜昱蕾%尹芳%杨桂涛%谢华红%宋久刚%刘杰%樊代明
杜昱蕾%尹芳%楊桂濤%謝華紅%宋久剛%劉傑%樊代明
두욱뢰%윤방%양계도%사화홍%송구강%류걸%번대명
有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)%RNA干扰技术%胃癌%细胞周期
有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2)%RNA榦擾技術%胃癌%細胞週期
유사분렬조체결함단백2(MAD2)%RNA간우기술%위암%세포주기
目的:构建MAD2(有丝分裂阻滞缺陷蛋白2)特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制MAD2基因表达对胃癌细胞生长和细胞周期的影响.方法:构建MAD2 siRNA真核表达载体,脂质体法将pSilencer3.1空载体和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/MAD2-siRNA2真核表达载体分别导入人胃癌细胞系SGC7901.稳定转染后Western blot和RT-PCR检测胃癌细胞内MAD2蛋白及mRNA水平的表达情况,挑选出抑制效果最好的单个克隆.MTF法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测纺锤体抑制剂长春新碱作用后,胃癌细胞MAD2-siRNA转染组和空载体组细胞周期的分布.结果:成功构建MAD2 siRNA真核表达载体,转染胃癌细胞SGC7901可使其MAD2蛋白及mRNA表达显著下调.MAD2表达降低的胃癌细胞生长速度明显增快(P＜0.01),经长春新碱作用后不能被阻滞于有丝分裂期.结论:小干扰RNA技术可以有效地特异性抑制胃癌细胞纺锤体检查点关键蛋白MAD2的表达.MAD2的抑制可使胃癌细胞SGC7901生长加速,增殖能力增强,同时减弱纺锤体抑制剂长春新碱阻滞细胞周期的作用.
目的:構建MAD2(有絲分裂阻滯缺陷蛋白2)特異性RNA榦擾真覈錶達載體,體外觀察抑製MAD2基因錶達對胃癌細胞生長和細胞週期的影響.方法:構建MAD2 siRNA真覈錶達載體,脂質體法將pSilencer3.1空載體和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/MAD2-siRNA2真覈錶達載體分彆導入人胃癌細胞繫SGC7901.穩定轉染後Western blot和RT-PCR檢測胃癌細胞內MAD2蛋白及mRNA水平的錶達情況,挑選齣抑製效果最好的單箇剋隆.MTF法檢測各實驗組細胞生長情況,流式細胞術檢測紡錘體抑製劑長春新堿作用後,胃癌細胞MAD2-siRNA轉染組和空載體組細胞週期的分佈.結果:成功構建MAD2 siRNA真覈錶達載體,轉染胃癌細胞SGC7901可使其MAD2蛋白及mRNA錶達顯著下調.MAD2錶達降低的胃癌細胞生長速度明顯增快(P＜0.01),經長春新堿作用後不能被阻滯于有絲分裂期.結論:小榦擾RNA技術可以有效地特異性抑製胃癌細胞紡錘體檢查點關鍵蛋白MAD2的錶達.MAD2的抑製可使胃癌細胞SGC7901生長加速,增殖能力增彊,同時減弱紡錘體抑製劑長春新堿阻滯細胞週期的作用.
목적:구건MAD2(유사분렬조체결함단백2)특이성RNA간우진핵표체재체,체외관찰억제MAD2기인표체대위암세포생장화세포주기적영향.방법:구건MAD2 siRNA진핵표체재체,지질체법장pSilencer3.1공재체화pSilencer3.1/MAD2-siRNA1화pSilencer3.1/MAD2-siRNA2진핵표체재체분별도입인위암세포계SGC7901.은정전염후Western blot화RT-PCR검측위암세포내MAD2단백급mRNA수평적표체정황,도선출억제효과최호적단개극륭.MTF법검측각실험조세포생장정황,류식세포술검측방추체억제제장춘신감작용후,위암세포MAD2-siRNA전염조화공재체조세포주기적분포.결과:성공구건MAD2 siRNA진핵표체재체,전염위암세포SGC7901가사기MAD2단백급mRNA표체현저하조.MAD2표체강저적위암세포생장속도명현증쾌(P＜0.01),경장춘신감작용후불능피조체우유사분렬기.결론:소간우RNA기술가이유효지특이성억제위암세포방추체검사점관건단백MAD2적표체.MAD2적억제가사위암세포SGC7901생장가속,증식능력증강,동시감약방추체억제제장춘신감조체세포주기적작용.
