昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2006年
2期
213-218
,共6页
朱健琦%刘志刚%高波%吉坤美%邢苗
硃健琦%劉誌剛%高波%吉坤美%邢苗
주건기%류지강%고파%길곤미%형묘
粉尘螨%变应原%表达%纯化%特性鉴定
粉塵螨%變應原%錶達%純化%特性鑒定
분진만%변응원%표체%순화%특성감정
粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoides farinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应.挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18).经扩增后,用Nde Ⅰ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在.表达产物经亲和层析纯化,用Western blot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性.
粉塵螨Ⅰ類變應原(Der fⅠ)是粉塵螨Dermatophagoides farinae主要變應原,可引髮Ⅰ型變態反應.挑取純培養的粉塵螨,提取總RNA,採用RT-PCR方法有效地擴增齣DerfⅠ片段,產物連接入T載體(pMD18).經擴增後,用Nde Ⅰ和XhoⅠ雙酶切後將目的片段連接到pET24a錶達載體上,得到重組質粒pET24a-DerfⅠ,工程菌經IPTG誘導培養,高效錶達齣DerfⅠ蛋白,該蛋白主要以包涵體形式存在.錶達產物經親和層析純化,用Western blot及ELISA方法檢測免疫學活性,結果錶明目的蛋白具有良好的免疫原性.
분진만Ⅰ류변응원(Der fⅠ)시분진만Dermatophagoides farinae주요변응원,가인발Ⅰ형변태반응.도취순배양적분진만,제취총RNA,채용RT-PCR방법유효지확증출DerfⅠ편단,산물련접입T재체(pMD18).경확증후,용Nde Ⅰ화XhoⅠ쌍매절후장목적편단련접도pET24a표체재체상,득도중조질립pET24a-DerfⅠ,공정균경IPTG유도배양,고효표체출DerfⅠ단백,해단백주요이포함체형식존재.표체산물경친화층석순화,용Western blot급ELISA방법검측면역학활성,결과표명목적단백구유량호적면역원성.
