中国耳鼻咽喉头颈外科
中國耳鼻嚥喉頭頸外科
중국이비인후두경외과
CHINESE ARCHIVER OF OTOLARYNGOLOGY-HEAD AND NECK SURGERY
2006年
2期
77-81
,共5页
陈剑秋%朱春生%贡振扬%王延生%林家峰%周京风
陳劍鞦%硃春生%貢振颺%王延生%林傢峰%週京風
진검추%주춘생%공진양%왕연생%림가봉%주경풍
肿瘤坏死因子类%端粒,末端转移酶%基因表达%细胞凋亡%基因疗法
腫瘤壞死因子類%耑粒,末耑轉移酶%基因錶達%細胞凋亡%基因療法
종류배사인자류%단립,말단전이매%기인표체%세포조망%기인요법
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducingligand,TRAIL)基因结合端粒酶逆转录酶(humantelomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子对人鼻咽癌细胞株CN E-2的靶向治疗作用.方法刺激人外周血淋巴细胞增殖,提取总RNA.采用RT-PCR扩增含有IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,克隆入pGL3-181 hTERT端粒酶启动子下游,构建真核表达载体pGL3-1 81 hTERT/TRAIL.将该载体经阳离子脂质体(lipofection,Lip)转染入CNE-2和人正常肝细胞株H L-7702中,应用流式细胞仪技术(FC M)、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡.结果转染pGL3-1 81 hTERT/TRAIL的CNE-2组,FCM分析G1期前出现凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳可见"梯状"现象;电镜下见细胞缩小、染色质固缩、核断裂等.结论已构建的真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL转染后能诱导鼻咽癌细胞CNE-2凋亡;在肿瘤研究中,TRAIL结合hTERT启动子可为肿瘤基因治疗的靶向性提供实验依据.
目的探討腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducingligand,TRAIL)基因結閤耑粒酶逆轉錄酶(humantelomerase reverse transcriptase,hTERT)啟動子對人鼻嚥癌細胞株CN E-2的靶嚮治療作用.方法刺激人外週血淋巴細胞增殖,提取總RNA.採用RT-PCR擴增含有IL-2信號肽和TRAIL凋亡誘導功能區的融閤基因,剋隆入pGL3-181 hTERT耑粒酶啟動子下遊,構建真覈錶達載體pGL3-1 81 hTERT/TRAIL.將該載體經暘離子脂質體(lipofection,Lip)轉染入CNE-2和人正常肝細胞株H L-7702中,應用流式細胞儀技術(FC M)、形態學觀察、瓊脂糖凝膠電泳方法檢測細胞凋亡.結果轉染pGL3-1 81 hTERT/TRAIL的CNE-2組,FCM分析G1期前齣現凋亡峰;瓊脂糖凝膠電泳可見"梯狀"現象;電鏡下見細胞縮小、染色質固縮、覈斷裂等.結論已構建的真覈錶達載體pGL3-181hTERT/TRAIL轉染後能誘導鼻嚥癌細胞CNE-2凋亡;在腫瘤研究中,TRAIL結閤hTERT啟動子可為腫瘤基因治療的靶嚮性提供實驗依據.
목적탐토종류배사인자상관조망유도배체(tumor necrosisfactor-related apoptosis inducingligand,TRAIL)기인결합단립매역전록매(humantelomerase reverse transcriptase,hTERT)계동자대인비인암세포주CN E-2적파향치료작용.방법자격인외주혈림파세포증식,제취총RNA.채용RT-PCR확증함유IL-2신호태화TRAIL조망유도공능구적융합기인,극륭입pGL3-181 hTERT단립매계동자하유,구건진핵표체재체pGL3-1 81 hTERT/TRAIL.장해재체경양리자지질체(lipofection,Lip)전염입CNE-2화인정상간세포주H L-7702중,응용류식세포의기술(FC M)、형태학관찰、경지당응효전영방법검측세포조망.결과전염pGL3-1 81 hTERT/TRAIL적CNE-2조,FCM분석G1기전출현조망봉;경지당응효전영가견"제상"현상;전경하견세포축소、염색질고축、핵단렬등.결론이구건적진핵표체재체pGL3-181hTERT/TRAIL전염후능유도비인암세포CNE-2조망;재종류연구중,TRAIL결합hTERT계동자가위종류기인치료적파향성제공실험의거.
