中国肿瘤生物治疗杂志
中國腫瘤生物治療雜誌
중국종류생물치료잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER BIOTHERAPY
2006年
1期
32-36
,共5页
张青%张思河%苏明权%杨洁%沈建军%郝晓柯
張青%張思河%囌明權%楊潔%瀋建軍%郝曉柯
장청%장사하%소명권%양길%침건군%학효가
噬菌体抗体库%导向筛选%前列腺癌%人源化
噬菌體抗體庫%導嚮篩選%前列腺癌%人源化
서균체항체고%도향사선%전렬선암%인원화
目的:建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库,筛选抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源性抗体轻链.方法:PCR扩增前列腺癌患者外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因,克隆入含鼠源抗γ-sm抗体Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切等分别对库容、基因重组率和多样性进行鉴定.以M13K07辅助噬菌体超感染,利用纯化的γ-sm对杂合库进行筛选,对筛出的阳性克隆进行功能检测.结果:构建了库容量为1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的人-鼠杂合噬菌体抗体库.ELISA检测出2个强阳性克隆,Western blot确证为抗γ-sm的人-鼠杂合Fab,竞争ELISA显示其表观亲和力约为亲本鼠抗体亲和力的71.8%.DNA测序显示筛到的人源轻链可变区基因属IGKV4-1*01胚系家族.结论:成功得到人源性抗γ-sm抗体轻链,为进一步获得全人源化抗体奠定了基础.
目的:建立人-鼠雜閤Fab噬菌體抗體庫,篩選抗γ-精漿蛋白(γ-sm)人源性抗體輕鏈.方法:PCR擴增前列腺癌患者外週血淋巴細胞人抗體全套輕鏈基因,剋隆入含鼠源抗γ-sm抗體Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠雜閤Fab噬菌體抗體庫.通過稀釋滴定、限製性酶切等分彆對庫容、基因重組率和多樣性進行鑒定.以M13K07輔助噬菌體超感染,利用純化的γ-sm對雜閤庫進行篩選,對篩齣的暘性剋隆進行功能檢測.結果:構建瞭庫容量為1.2×107CFU、重組率為90%、多樣性好的人-鼠雜閤噬菌體抗體庫.ELISA檢測齣2箇彊暘性剋隆,Western blot確證為抗γ-sm的人-鼠雜閤Fab,競爭ELISA顯示其錶觀親和力約為親本鼠抗體親和力的71.8%.DNA測序顯示篩到的人源輕鏈可變區基因屬IGKV4-1*01胚繫傢族.結論:成功得到人源性抗γ-sm抗體輕鏈,為進一步穫得全人源化抗體奠定瞭基礎.
목적:건립인-서잡합Fab서균체항체고,사선항γ-정장단백(γ-sm)인원성항체경련.방법:PCR확증전렬선암환자외주혈림파세포인항체전투경련기인,극륭입함서원항γ-sm항체Fd기인적pComb3X서립중,건립인-서잡합Fab서균체항체고.통과희석적정、한제성매절등분별대고용、기인중조솔화다양성진행감정.이M13K07보조서균체초감염,이용순화적γ-sm대잡합고진행사선,대사출적양성극륭진행공능검측.결과:구건료고용량위1.2×107CFU、중조솔위90%、다양성호적인-서잡합서균체항체고.ELISA검측출2개강양성극륭,Western blot학증위항γ-sm적인-서잡합Fab,경쟁ELISA현시기표관친화력약위친본서항체친화력적71.8%.DNA측서현시사도적인원경련가변구기인속IGKV4-1*01배계가족.결론:성공득도인원성항γ-sm항체경련,위진일보획득전인원화항체전정료기출.
