CAJ | 학술논문

目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.
목적:연구가용성세균양화환원단백AZURIN대인골육류U2OS세포적생장억제효응급조망유도작용.방법:용PCR방법유가단포균염색체DNA확증AZURIN기인편단,장기융합삽입원핵표체재체pQE30중,병재M15대장간균표체가용성적AZURIN단백.해단백경순화화복성후,유도인골육류U2OS세포,통과MTT법、Hoechest 33258형광염색법급도치현미경관찰조망세포;류식세포의분석세포주기、조망솔、선립체막전위변화화DNA단렬실험검측세포증식화세포조망.결과:AZURIN적단백순도체99.1%이상.용50～200 mg/L적단백유도인골육류U2OS세포12 h이상세포적생장화증식피현저억제,병차관찰도전형적조망세포、조망소체、조망봉급DNA적편단화등조망적특정성변화,선립체과막전위수착AZURIN작용적시간화농도적증가이축점강저,대조조화50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN조세포선립체과막전위분별강저(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).세포적조망솔야정제량의뢰화시간의뢰관계,작용48 h시조망솔체봉치(35.8±3.78)%.결론:이용대장간균제비적소분자단백AZURIN대인골육류U2OS세포유명현적증식억제효응화조망유도작용,선립체도경가능시AZURIN유도세포조망적궤제지일.