CAJ | 학술논문

目的:研究小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)定向诱导分化为神经样细胞过程中蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)的表达变化,探讨可能涉及ESC定向分化的信号机制.方法:ES-D3细胞株用不含小鼠白血病抑制因子(mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)的ESC培养液培养4 d,形成胚胎体(embryoid bodies,Ebs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,经5×10-7 mol/L维甲酸(retinoic acid,RA)诱导后,用神经特异性烯醇化酶(NSE)和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第1、3、5、7和14天用Western印迹和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PKCα亚型的表达变化.结果:诱导前免疫组化发现PKCα在ES-D3细胞有广泛的棕黄色的阳性表达,以细胞浆和细胞膜最明显;Western印迹发现PKCα出现一条蛋白印迹条带,分子量约为84kD;诱导后第3天,NSE和NF-200开始表达,第7天达到高峰;诱导后Western印迹和RT-PCR方法都显示PKCα表达量急剧下降,以后逐渐升高,至第14天基本恢复至正常水平.结论:在RA诱导ESC定向分化为神经样细胞过程中,PKCα有独特的时空表达特点,它可能对ESC的分化有非常重要的调控作用.
목적:연구소서배태간세포(embryonic stem cells,ESC)정향유도분화위신경양세포과정중단백격매Cα(protein kinase Cα,PKCα)적표체변화,탐토가능섭급ESC정향분화적신호궤제.방법:ES-D3세포주용불함소서백혈병억제인자(mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)적ESC배양액배양4 d,형성배태체(embryoid bodies,Ebs),재분별충식우예치유개파편적6공판화직경100mm적배양명,경5×10-7 mol/L유갑산(retinoic acid,RA)유도후,용신경특이성희순화매(NSE)화NF-200래감정분화세포적류형,재유도후제1、3、5、7화14천용Western인적화역전록취합매련반응(RT-PCR)방법검측PKCα아형적표체변화.결과:유도전면역조화발현PKCα재ES-D3세포유엄범적종황색적양성표체,이세포장화세포막최명현;Western인적발현PKCα출현일조단백인적조대,분자량약위84kD;유도후제3천,NSE화NF-200개시표체,제7천체도고봉;유도후Western인적화RT-PCR방법도현시PKCα표체량급극하강,이후축점승고,지제14천기본회복지정상수평.결론:재RA유도ESC정향분화위신경양세포과정중,PKCα유독특적시공표체특점,타가능대ESC적분화유비상중요적조공작용.