武汉大学学报(医学版)
武漢大學學報(醫學版)
무한대학학보(의학판)
Wuhan University(Medical Edition)
2001年
4期
300-303
,共4页
徐芳玲%杨占秋%万瑜%肖红%申元英%文利%肖春惠%杨钢
徐芳玲%楊佔鞦%萬瑜%肖紅%申元英%文利%肖春惠%楊鋼
서방령%양점추%만유%초홍%신원영%문리%초춘혜%양강
逆转录,聚合酶链反应%生物素%亲和素%血管紧张素Ⅱ,受体%基因表达
逆轉錄,聚閤酶鏈反應%生物素%親和素%血管緊張素Ⅱ,受體%基因錶達
역전록,취합매련반응%생물소%친화소%혈관긴장소Ⅱ,수체%기인표체
目的:建立一种简便、特异的检测组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)受体基因表达变化的半定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR)技术.方法:采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA,用生物素(biotin, B)标记的AngⅡ受体的特异引物进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化后,再与过氧化物酶标记生物素竞争性地结合包被到酶标板上的亲和素(avidin),经过显色反应并测定其吸光度值可反映特异性PCR产物量,从而推断模板核酸中AngⅡ受体基因的相对含量.结果:异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA的质量较高;PCR的最适反应条件为94 ℃变性30 s、59 ℃退火40 s、72 ℃延伸60 s,循环33次,最后72 ℃延伸5 min;酶标仪所测阴性对照和扩增产物光密度之差能够反映不同模板中AngⅡ受体基因的相对含量.结论:该方法是一种简便、特异、可行的半定量RT-PCR基因检测技术.
目的:建立一種簡便、特異的檢測組織血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)受體基因錶達變化的半定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR)技術.方法:採用異硫氰痠胍-酚-氯倣法提取組織總RNA,用生物素(biotin, B)標記的AngⅡ受體的特異引物進行RT-PCR擴增,PCR產物純化後,再與過氧化物酶標記生物素競爭性地結閤包被到酶標闆上的親和素(avidin),經過顯色反應併測定其吸光度值可反映特異性PCR產物量,從而推斷模闆覈痠中AngⅡ受體基因的相對含量.結果:異硫氰痠胍-酚-氯倣法提取組織總RNA的質量較高;PCR的最適反應條件為94 ℃變性30 s、59 ℃退火40 s、72 ℃延伸60 s,循環33次,最後72 ℃延伸5 min;酶標儀所測陰性對照和擴增產物光密度之差能夠反映不同模闆中AngⅡ受體基因的相對含量.結論:該方法是一種簡便、特異、可行的半定量RT-PCR基因檢測技術.
목적:건립일충간편、특이적검측조직혈관긴장소Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)수체기인표체변화적반정량역전록-취합매련반응(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR)기술.방법:채용이류청산고-분-록방법제취조직총RNA,용생물소(biotin, B)표기적AngⅡ수체적특이인물진행RT-PCR확증,PCR산물순화후,재여과양화물매표기생물소경쟁성지결합포피도매표판상적친화소(avidin),경과현색반응병측정기흡광도치가반영특이성PCR산물량,종이추단모판핵산중AngⅡ수체기인적상대함량.결과:이류청산고-분-록방법제취조직총RNA적질량교고;PCR적최괄반응조건위94 ℃변성30 s、59 ℃퇴화40 s、72 ℃연신60 s,순배33차,최후72 ℃연신5 min;매표의소측음성대조화확증산물광밀도지차능구반영불동모판중AngⅡ수체기인적상대함량.결론:해방법시일충간편、특이、가행적반정량RT-PCR기인검측기술.
