西安交通大学学报(医学版)
西安交通大學學報(醫學版)
서안교통대학학보(의학판)
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2003年
1期
14-16,29
,共4页
李瑶琛%孔令洪%王一理%尚宁宽%耿宜萍%司履生
李瑤琛%孔令洪%王一理%尚寧寬%耿宜萍%司履生
리요침%공령홍%왕일리%상저관%경의평%사리생
TNF-α%突变体%蛋白表达
TNF-α%突變體%蛋白錶達
TNF-α%돌변체%단백표체
目的采用原核表达系统,表达人突变型471TNF-α蛋白,并检测其生物学活性.方法采用PCR技术扩增突变型471TNF-α及野生型TNF-α cDNA片段,克隆入中间载体pUCm-T中,并测序证实.以限制性内切酶切下目的片段,克隆入pBV220中,转入大肠杆菌DH5α,温度诱导表达野生型及突变型471TNF-α蛋白.初步纯化蛋白后,采用MTT法评估两者对L929细胞的杀伤作用.结果①获得了测序正确的野生型TNF-α及突变型471TNF-α的cDNA克隆;②构建了正常人野生型TNF-α及突变型471TNF-α重组表达质粒;③经温度诱导,TNF-α及突变型471TNF-α蛋白均获得了表达;④初步的生物学活性研究表明,突变型471TNF-α蛋白的杀伤作用显著高于野生型.结论突变型471TNF-α的生物学活性优于野生型TNF-α,为进一步开展TNF-α的基础及临床研究奠定了基础.
目的採用原覈錶達繫統,錶達人突變型471TNF-α蛋白,併檢測其生物學活性.方法採用PCR技術擴增突變型471TNF-α及野生型TNF-α cDNA片段,剋隆入中間載體pUCm-T中,併測序證實.以限製性內切酶切下目的片段,剋隆入pBV220中,轉入大腸桿菌DH5α,溫度誘導錶達野生型及突變型471TNF-α蛋白.初步純化蛋白後,採用MTT法評估兩者對L929細胞的殺傷作用.結果①穫得瞭測序正確的野生型TNF-α及突變型471TNF-α的cDNA剋隆;②構建瞭正常人野生型TNF-α及突變型471TNF-α重組錶達質粒;③經溫度誘導,TNF-α及突變型471TNF-α蛋白均穫得瞭錶達;④初步的生物學活性研究錶明,突變型471TNF-α蛋白的殺傷作用顯著高于野生型.結論突變型471TNF-α的生物學活性優于野生型TNF-α,為進一步開展TNF-α的基礎及臨床研究奠定瞭基礎.
목적채용원핵표체계통,표체인돌변형471TNF-α단백,병검측기생물학활성.방법채용PCR기술확증돌변형471TNF-α급야생형TNF-α cDNA편단,극륭입중간재체pUCm-T중,병측서증실.이한제성내절매절하목적편단,극륭입pBV220중,전입대장간균DH5α,온도유도표체야생형급돌변형471TNF-α단백.초보순화단백후,채용MTT법평고량자대L929세포적살상작용.결과①획득료측서정학적야생형TNF-α급돌변형471TNF-α적cDNA극륭;②구건료정상인야생형TNF-α급돌변형471TNF-α중조표체질립;③경온도유도,TNF-α급돌변형471TNF-α단백균획득료표체;④초보적생물학활성연구표명,돌변형471TNF-α단백적살상작용현저고우야생형.결론돌변형471TNF-α적생물학활성우우야생형TNF-α,위진일보개전TNF-α적기출급림상연구전정료기출.
