现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2002年
3期
1-3
,共3页
张菊%阎小君%郭晏海%李丁%段杰%苏成芝
張菊%閻小君%郭晏海%李丁%段傑%囌成芝
장국%염소군%곽안해%리정%단걸%소성지
解脲支原体%MB抗原主蛋白基因%克隆/表达
解脲支原體%MB抗原主蛋白基因%剋隆/錶達
해뇨지원체%MB항원주단백기인%극륭/표체
目的从新鲜培养的解脲支原体(URA)Ⅰ型培养液获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,并体外表达,获得具有抗原活性的原核表达蛋白,为研制广谱、低廉及方便准确的URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础.方法从新鲜培养的URA标准株Ⅰ型培养液提取DNA模板,采用特异引物及聚合酶链方法获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,经克隆入测序载体验证DNA大小及序列后,将MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性.结果以笔者设计的特异引物,能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,其插入原核表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论所得到的MB抗原主蛋白N端1/3保守区片段的基因,与GENE BANK检索序列一致.在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于URA抗体检测及疫苗研制.
目的從新鮮培養的解脲支原體(URA)Ⅰ型培養液穫得其MB抗原主蛋白N耑1/3保守區的基因,併體外錶達,穫得具有抗原活性的原覈錶達蛋白,為研製廣譜、低廉及方便準確的URA感染的診斷及治療方法提供物質基礎.方法從新鮮培養的URA標準株Ⅰ型培養液提取DNA模闆,採用特異引物及聚閤酶鏈方法穫得其MB抗原主蛋白N耑1/3保守區的基因,經剋隆入測序載體驗證DNA大小及序列後,將MB抗原主蛋白N耑1/3保守區的基因剋隆入高效原覈錶達載體,併在大腸桿菌中錶達,初步以Western-blot測定錶達產物的抗原性即與感染者暘性血清的反應活性.結果以筆者設計的特異引物,能得到預期大小的PCR產物,併能插入預定的剋隆載體中測序,所得基因的序列符閤目的基因的序列,其插入原覈錶達載體能穫得錶達,且錶達產物具有抗原活性,能與感染患者的血清髮生抗原抗體反應.結論所得到的MB抗原主蛋白N耑1/3保守區片段的基因,與GENE BANK檢索序列一緻.在大腸桿菌中錶達此片段所穫得的錶達產物,有抗原活性,有望用于URA抗體檢測及疫苗研製.
목적종신선배양적해뇨지원체(URA)Ⅰ형배양액획득기MB항원주단백N단1/3보수구적기인,병체외표체,획득구유항원활성적원핵표체단백,위연제엄보、저렴급방편준학적URA감염적진단급치료방법제공물질기출.방법종신선배양적URA표준주Ⅰ형배양액제취DNA모판,채용특이인물급취합매련방법획득기MB항원주단백N단1/3보수구적기인,경극륭입측서재체험증DNA대소급서렬후,장MB항원주단백N단1/3보수구적기인극륭입고효원핵표체재체,병재대장간균중표체,초보이Western-blot측정표체산물적항원성즉여감염자양성혈청적반응활성.결과이필자설계적특이인물,능득도예기대소적PCR산물,병능삽입예정적극륭재체중측서,소득기인적서렬부합목적기인적서렬,기삽입원핵표체재체능획득표체,차표체산물구유항원활성,능여감염환자적혈청발생항원항체반응.결론소득도적MB항원주단백N단1/3보수구편단적기인,여GENE BANK검색서렬일치.재대장간균중표체차편단소획득적표체산물,유항원활성,유망용우URA항체검측급역묘연제.
