西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2002年
4期
28-31,87
,共5页
袁静%唐兴芳%刘变芳%李元瑞
袁靜%唐興芳%劉變芳%李元瑞
원정%당흥방%류변방%리원서
牛金属硫蛋白素bMTein%PCR%pGEM-T载体%基因克隆%DNA序列分析%pGEX4T-1%大肠杆菌%亲和层析%SDS-PAGE%GST : bMTcin
牛金屬硫蛋白素bMTein%PCR%pGEM-T載體%基因剋隆%DNA序列分析%pGEX4T-1%大腸桿菌%親和層析%SDS-PAGE%GST : bMTcin
우금속류단백소bMTein%PCR%pGEM-T재체%기인극륭%DNA서렬분석%pGEX4T-1%대장간균%친화층석%SDS-PAGE%GST : bMTcin
以本实验室由RT-PCR扩增得到的含有牛金属硫蛋白(bMT)cDNA的重组质粒pYJ101为模板,PCR扩增出牛金属硫蛋白素bMTcin的编码区,将其克隆到pGEM-T载体上并进行DNA序列测定.利用融合表达载体pGEX4T-1,在E.coli中诱导表达bMTcin,经过Glutathine Sepharose 4B亲和层析纯化后,SDS-PAGE检测GST:bMTcin的条带.结果表明,所克隆的bMTcin序列全长为141bp,其DNA序列与原模板中的序列完全相同,与GenBank中另外5个bMTcin DNA相比,第31位和86位与ConneeIy的序列为A和G,导致第11位(Thr)和29位(Arg)的氨基酸不同于其他4个序列(11位为Ala,29位为Lys).融合表达产物亲和层析纯化后,用SDS-PAGE检测可见融合蛋白GST : bMTcin的条带,紫外分光光度计测定,融合蛋白GST:bMTcin的表达量大约为1.1 mg/L发酵液.
以本實驗室由RT-PCR擴增得到的含有牛金屬硫蛋白(bMT)cDNA的重組質粒pYJ101為模闆,PCR擴增齣牛金屬硫蛋白素bMTcin的編碼區,將其剋隆到pGEM-T載體上併進行DNA序列測定.利用融閤錶達載體pGEX4T-1,在E.coli中誘導錶達bMTcin,經過Glutathine Sepharose 4B親和層析純化後,SDS-PAGE檢測GST:bMTcin的條帶.結果錶明,所剋隆的bMTcin序列全長為141bp,其DNA序列與原模闆中的序列完全相同,與GenBank中另外5箇bMTcin DNA相比,第31位和86位與ConneeIy的序列為A和G,導緻第11位(Thr)和29位(Arg)的氨基痠不同于其他4箇序列(11位為Ala,29位為Lys).融閤錶達產物親和層析純化後,用SDS-PAGE檢測可見融閤蛋白GST : bMTcin的條帶,紫外分光光度計測定,融閤蛋白GST:bMTcin的錶達量大約為1.1 mg/L髮酵液.
이본실험실유RT-PCR확증득도적함유우금속류단백(bMT)cDNA적중조질립pYJ101위모판,PCR확증출우금속류단백소bMTcin적편마구,장기극륭도pGEM-T재체상병진행DNA서렬측정.이용융합표체재체pGEX4T-1,재E.coli중유도표체bMTcin,경과Glutathine Sepharose 4B친화층석순화후,SDS-PAGE검측GST:bMTcin적조대.결과표명,소극륭적bMTcin서렬전장위141bp,기DNA서렬여원모판중적서렬완전상동,여GenBank중령외5개bMTcin DNA상비,제31위화86위여ConneeIy적서렬위A화G,도치제11위(Thr)화29위(Arg)적안기산불동우기타4개서렬(11위위Ala,29위위Lys).융합표체산물친화층석순화후,용SDS-PAGE검측가견융합단백GST : bMTcin적조대,자외분광광도계측정,융합단백GST:bMTcin적표체량대약위1.1 mg/L발효액.
