热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2002年
2期
114-117
,共4页
彭鸿娟%陈晓光%支国舟%王珣章
彭鴻娟%陳曉光%支國舟%王珣章
팽홍연%진효광%지국주%왕순장
日本血吸虫%曼氏血吸虫%8kDa钙结合蛋白%pET32a(+)
日本血吸蟲%曼氏血吸蟲%8kDa鈣結閤蛋白%pET32a(+)
일본혈흡충%만씨혈흡충%8kDa개결합단백%pET32a(+)
目的将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因-Ⅲ8kDa钙结合蛋白(Calcium-binding protein, CBP) cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上,为下一步对该基因的功能进行研究做准备.方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫钙结合蛋白cDNA高度同源. 根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物, 将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjCBP基因亚克隆入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中. 结果所发现的新基因与曼氏血吸虫8kDa CBP基因的同源性达82%, PCR产物的片段长度与预期大小一致, 重组T载体及表达质粒经EcoRI及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段. 结论所发现的cDNA与曼氏血吸虫8kDa CBP cDAN高度同源, 并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a(+)-SjCBP.
目的將用EST策略及同源性搜索髮現的日本血吸蟲新基因-Ⅲ8kDa鈣結閤蛋白(Calcium-binding protein, CBP) cDNA剋隆到錶達質粒pET32a(+)上,為下一步對該基因的功能進行研究做準備.方法將插入于pTriplEx2 質粒上的cDNA進行測序,測序結果經BLASTn程序搜索,髮現該插入cDNA序列與曼氏血吸蟲鈣結閤蛋白cDNA高度同源. 根據錶達質粒pET32a(+)上的剋隆位點及該cDNA序列設計PCR引物, 將PCR產物純化後連接到pMD 18-T載體上,將重組T載體經EcoRI/XhoI雙酶切後切下的SjCBP基因亞剋隆入原覈可溶性錶達質粒pET32a(+)中. 結果所髮現的新基因與曼氏血吸蟲8kDa CBP基因的同源性達82%, PCR產物的片段長度與預期大小一緻, 重組T載體及錶達質粒經EcoRI及XhoI雙酶切後證明具有與目標片段長度相符的插入片段. 結論所髮現的cDNA與曼氏血吸蟲8kDa CBP cDAN高度同源, 併且已成功地構建齣重組錶達質粒pET32a(+)-SjCBP.
목적장용EST책략급동원성수색발현적일본혈흡충신기인-Ⅲ8kDa개결합단백(Calcium-binding protein, CBP) cDNA극륭도표체질립pET32a(+)상,위하일보대해기인적공능진행연구주준비.방법장삽입우pTriplEx2 질립상적cDNA진행측서,측서결과경BLASTn정서수색,발현해삽입cDNA서렬여만씨혈흡충개결합단백cDNA고도동원. 근거표체질립pET32a(+)상적극륭위점급해cDNA서렬설계PCR인물, 장PCR산물순화후련접도pMD 18-T재체상,장중조T재체경EcoRI/XhoI쌍매절후절하적SjCBP기인아극륭입원핵가용성표체질립pET32a(+)중. 결과소발현적신기인여만씨혈흡충8kDa CBP기인적동원성체82%, PCR산물적편단장도여예기대소일치, 중조T재체급표체질립경EcoRI급XhoI쌍매절후증명구유여목표편단장도상부적삽입편단. 결론소발현적cDNA여만씨혈흡충8kDa CBP cDAN고도동원, 병차이성공지구건출중조표체질립pET32a(+)-SjCBP.
