细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
1期
118-122
,共5页
刘承利%窦科峰%朱帮福%臧晓霞%柴玉波%杜可军%陈苏民
劉承利%竇科峰%硃幫福%臧曉霞%柴玉波%杜可軍%陳囌民
류승리%두과봉%주방복%장효하%시옥파%두가군%진소민
小鼠%4-1BBL%基因克隆%协同刺激分子%肿瘤疫苗
小鼠%4-1BBL%基因剋隆%協同刺激分子%腫瘤疫苗
소서%4-1BBL%기인극륭%협동자격분자%종류역묘
目的:克隆小鼠4-1BBL基因, 构建其真核表达载体, 并观察其在抗肝癌免疫中的作用.方法:取C57BL/6小鼠脾细胞, 经PHA诱导后, 以RT-PCR克隆4-1BBLcDNA, 测序, 构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-m4-1BBL.以重组体转染小鼠肝癌细胞Hepa1-6, 经G418筛选后, 以RT-PCR、间接免疫荧光及流式细胞仪, 检测m4-1BBL以获得稳定高表达克隆.然后将其制成肿瘤细胞疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养, 采用 MTT比色法测定淋巴细胞的特异性杀伤活性.结果:从小鼠脾细胞中克隆到m4-1BBLcDNA, 经测序完全正确.所构建的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-m4-1BBL, 在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中获得稳定高效表达.与野生型Hepa1-6细胞相比较, m4-1BBL基因转染的Hepa1-6细胞疫苗能较有效地诱导淋巴细胞产生针对野生型 Hepa1-6细胞的特异性杀伤活性 (P<0.01).结论:将 m4-1BBL基因导入肝癌细胞中表达, 能提高其免疫原性, 诱导有效地抗肝癌免疫应答.
目的:剋隆小鼠4-1BBL基因, 構建其真覈錶達載體, 併觀察其在抗肝癌免疫中的作用.方法:取C57BL/6小鼠脾細胞, 經PHA誘導後, 以RT-PCR剋隆4-1BBLcDNA, 測序, 構建真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-m4-1BBL.以重組體轉染小鼠肝癌細胞Hepa1-6, 經G418篩選後, 以RT-PCR、間接免疫熒光及流式細胞儀, 檢測m4-1BBL以穫得穩定高錶達剋隆.然後將其製成腫瘤細胞疫苗與同源小鼠脾淋巴細胞混閤培養, 採用 MTT比色法測定淋巴細胞的特異性殺傷活性.結果:從小鼠脾細胞中剋隆到m4-1BBLcDNA, 經測序完全正確.所構建的真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-m4-1BBL, 在小鼠肝癌細胞Hepa1-6中穫得穩定高效錶達.與野生型Hepa1-6細胞相比較, m4-1BBL基因轉染的Hepa1-6細胞疫苗能較有效地誘導淋巴細胞產生針對野生型 Hepa1-6細胞的特異性殺傷活性 (P<0.01).結論:將 m4-1BBL基因導入肝癌細胞中錶達, 能提高其免疫原性, 誘導有效地抗肝癌免疫應答.
목적:극륭소서4-1BBL기인, 구건기진핵표체재체, 병관찰기재항간암면역중적작용.방법:취C57BL/6소서비세포, 경PHA유도후, 이RT-PCR극륭4-1BBLcDNA, 측서, 구건진핵표체질립pcDNA3.1(+)-m4-1BBL.이중조체전염소서간암세포Hepa1-6, 경G418사선후, 이RT-PCR、간접면역형광급류식세포의, 검측m4-1BBL이획득은정고표체극륭.연후장기제성종류세포역묘여동원소서비림파세포혼합배양, 채용 MTT비색법측정림파세포적특이성살상활성.결과:종소서비세포중극륭도m4-1BBLcDNA, 경측서완전정학.소구건적진핵표체질립pcDNA3.1(+)-m4-1BBL, 재소서간암세포Hepa1-6중획득은정고효표체.여야생형Hepa1-6세포상비교, m4-1BBL기인전염적Hepa1-6세포역묘능교유효지유도림파세포산생침대야생형 Hepa1-6세포적특이성살상활성 (P<0.01).결론:장 m4-1BBL기인도입간암세포중표체, 능제고기면역원성, 유도유효지항간암면역응답.
