CAJ | 학술논문

叶绿体依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)的硫氧还蛋白还原酶含有还原酶结构域和硫氧还蛋白结构域,每个结构域含有两个催化的Cys残基.利用RT-PCR克隆了编码成熟的依赖NADPH硫氧还蛋白还原酶基因,分别将还原酶结构域以及硫氧还蛋白结构域活性中心两个催化的Cys残基定点突变成Ser残基,将野生型和突变型基因分别插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28b,转化至大肠杆菌BL21(DE3),表达的重组蛋白N端含有组氨酸标签.电泳检测显示野生型硫氧还蛋白还原酶的可溶性表达水平受诱导温度和共表达分子伴侣GroEL、GroES和GrpE影响,而蛋白突变体主要表达为包涵体.纯化的重组野生型蛋白SDS-PAGE上显示亚基分子量为52kD,分别以DNTB(6,6′-Dinitro-3,3′-dithiodibenzoic acid)和胰岛素为底物,确定了硫氧还蛋白还原酶两个结构域的催化活性.本研究结果表明,玉米NTRC在大肠杆菌可溶性表达,纯化的重组蛋白具有硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶活性.
협록체의뢰연선알선표령이핵감산린산(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)적류양환단백환원매함유환원매결구역화류양환단백결구역,매개결구역함유량개최화적Cys잔기.이용RT-PCR극륭료편마성숙적의뢰NADPH류양환단백환원매기인,분별장환원매결구역이급류양환단백결구역활성중심량개최화적Cys잔기정점돌변성Ser잔기,장야생형화돌변형기인분별삽입대장간균(Escherichia coli)표체재체pET-28b,전화지대장간균BL21(DE3),표체적중조단백N단함유조안산표첨.전영검측현시야생형류양환단백환원매적가용성표체수평수유도온도화공표체분자반려GroEL、GroES화GrpE영향,이단백돌변체주요표체위포함체.순화적중조야생형단백SDS-PAGE상현시아기분자량위52kD,분별이DNTB(6,6′-Dinitro-3,3′-dithiodibenzoic acid)화이도소위저물,학정료류양환단백환원매량개결구역적최화활성.본연구결과표명,옥미NTRC재대장간균가용성표체,순화적중조단백구유류양환단백화류양환단백환원매활성.