山东农业大学学报（自然科学版）
山東農業大學學報（自然科學版）
산동농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANDONG AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2012年
1期
55-61
,共7页
王新建%朱瑞良%谭燕玲%魏凯%王慧%王尊民%赵庆友%赵昌亮
王新建%硃瑞良%譚燕玲%魏凱%王慧%王尊民%趙慶友%趙昌亮
왕신건%주서량%담연령%위개%왕혜%왕존민%조경우%조창량
超强毒法氏囊病病毒%细胞适应毒%克隆%VP2基因高变区%氨基酸序列%免疫保护效果
超彊毒法氏囊病病毒%細胞適應毒%剋隆%VP2基因高變區%氨基痠序列%免疫保護效果
초강독법씨낭병병독%세포괄응독%극륭%VP2기인고변구%안기산서렬%면역보호효과
本研究将以vvIBDV GX8/99株4株克隆化细胞毒为研究对象,通过鸡胚成纤维细胞连传至20代,得到4株克隆化毒F20代:GX-IBDVE10 C25 CL1-20、GX-IBDVE10 C25 CL2-20、GX-IBDVE10 C25 CL4-20、GX-IBDVE10 C25CL5-20.分别提取RNA,通过Nested-PCR、基因克隆、核苷酸序列测定和分析,从而摸索出了vvIBDV GX8/99株四株克隆株在细胞传代过程中VP2核苷酸序列和推导出的氨基酸序列的变化规律.与原始囊毒和D78疫苗毒相比,4个细胞适应毒克隆株F20 VP2高变区的约145个氨基酸中,有12个位点发生了相同的变异,变得与适应细胞的疫苗毒D78株基本一致.实验表明VP2高变区大多数氨基酸的变异与对细胞培养或组织的亲和性的关系更为密切.将4株克隆毒株的20代细胞毒免疫SPF鸡,40日龄进行攻毒实验,免疫效果明显,保护率几乎达到100％,二免后第14 d左右抗体浓度达到高峰.从抗体水平和病理组织学变化看,4株克隆化毒F20代中GX-IBDVE10C25CL4-20株免疫效果稳定,病理变化不明显,有望成为理想的疫苗株,为控制vvIBDV的感染提供一条新的途径.
本研究將以vvIBDV GX8/99株4株剋隆化細胞毒為研究對象,通過鷄胚成纖維細胞連傳至20代,得到4株剋隆化毒F20代:GX-IBDVE10 C25 CL1-20、GX-IBDVE10 C25 CL2-20、GX-IBDVE10 C25 CL4-20、GX-IBDVE10 C25CL5-20.分彆提取RNA,通過Nested-PCR、基因剋隆、覈苷痠序列測定和分析,從而摸索齣瞭vvIBDV GX8/99株四株剋隆株在細胞傳代過程中VP2覈苷痠序列和推導齣的氨基痠序列的變化規律.與原始囊毒和D78疫苗毒相比,4箇細胞適應毒剋隆株F20 VP2高變區的約145箇氨基痠中,有12箇位點髮生瞭相同的變異,變得與適應細胞的疫苗毒D78株基本一緻.實驗錶明VP2高變區大多數氨基痠的變異與對細胞培養或組織的親和性的關繫更為密切.將4株剋隆毒株的20代細胞毒免疫SPF鷄,40日齡進行攻毒實驗,免疫效果明顯,保護率幾乎達到100％,二免後第14 d左右抗體濃度達到高峰.從抗體水平和病理組織學變化看,4株剋隆化毒F20代中GX-IBDVE10C25CL4-20株免疫效果穩定,病理變化不明顯,有望成為理想的疫苗株,為控製vvIBDV的感染提供一條新的途徑.
본연구장이vvIBDV GX8/99주4주극륭화세포독위연구대상,통과계배성섬유세포련전지20대,득도4주극륭화독F20대:GX-IBDVE10 C25 CL1-20、GX-IBDVE10 C25 CL2-20、GX-IBDVE10 C25 CL4-20、GX-IBDVE10 C25CL5-20.분별제취RNA,통과Nested-PCR、기인극륭、핵감산서렬측정화분석,종이모색출료vvIBDV GX8/99주사주극륭주재세포전대과정중VP2핵감산서렬화추도출적안기산서렬적변화규률.여원시낭독화D78역묘독상비,4개세포괄응독극륭주F20 VP2고변구적약145개안기산중,유12개위점발생료상동적변이,변득여괄응세포적역묘독D78주기본일치.실험표명VP2고변구대다수안기산적변이여대세포배양혹조직적친화성적관계경위밀절.장4주극륭독주적20대세포독면역SPF계,40일령진행공독실험,면역효과명현,보호솔궤호체도100％,이면후제14 d좌우항체농도체도고봉.종항체수평화병리조직학변화간,4주극륭화독F20대중GX-IBDVE10C25CL4-20주면역효과은정,병리변화불명현,유망성위이상적역묘주,위공제vvIBDV적감염제공일조신적도경.
