浙江大学学报(理学版)
浙江大學學報(理學版)
절강대학학보(이학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY
2004年
3期
337-342
,共6页
邱丽燕%王金福%沈丹%金洁
邱麗燕%王金福%瀋丹%金潔
구려연%왕금복%침단%금길
骨髓间充质干细胞%扩增%成软骨样细胞
骨髓間充質榦細胞%擴增%成軟骨樣細胞
골수간충질간세포%확증%성연골양세포
从人骨髓中分离和培养间充质干细胞(MSCs),在原代和传代培养中其形态学上均为贴壁、纤维状的细胞,随着代次的增加细胞形态更加趋于一致.流式细胞仪鉴定CD45、CD34、CD117、HLA-DR阴性,CD29、CD166阳性,并随着培养代次的增加,阳性比率和阴性比率出现相应的上升和降低,说明细胞中MSCs纯度增加.第三代细胞大约有80%处于G0/G1期,S+G2+M期约20%,说明MSCs有强大的增殖潜能.在传代培养中的最适接种密度为5 000个/cm2左右.MSCs在体外经历了滞缓期、对数生长期、平稳期3个时期,传代培养的MSCs生长速度比原代的MSCs明显快很多.采用程序降温法对MSCs进行冻存,60～90 d后对冻存的MSCs进行复苏,发现MSCs仍可在体外良好生长4～6代,特定的MSCs样本可以扩增10代,说明经过冻存的细胞仍具有良好的增殖能力.对4例标本的前三代MSCs在体外利用TGF-β1和维生素C诱导两周后,用RT-PCR证明MSCs表达软骨特异性的Ⅱ型前胶原的mRNA,说明培养的细胞具有向成软骨样细胞分化的潜能,由此进一步证实其为MSCs.
從人骨髓中分離和培養間充質榦細胞(MSCs),在原代和傳代培養中其形態學上均為貼壁、纖維狀的細胞,隨著代次的增加細胞形態更加趨于一緻.流式細胞儀鑒定CD45、CD34、CD117、HLA-DR陰性,CD29、CD166暘性,併隨著培養代次的增加,暘性比率和陰性比率齣現相應的上升和降低,說明細胞中MSCs純度增加.第三代細胞大約有80%處于G0/G1期,S+G2+M期約20%,說明MSCs有彊大的增殖潛能.在傳代培養中的最適接種密度為5 000箇/cm2左右.MSCs在體外經歷瞭滯緩期、對數生長期、平穩期3箇時期,傳代培養的MSCs生長速度比原代的MSCs明顯快很多.採用程序降溫法對MSCs進行凍存,60～90 d後對凍存的MSCs進行複囌,髮現MSCs仍可在體外良好生長4～6代,特定的MSCs樣本可以擴增10代,說明經過凍存的細胞仍具有良好的增殖能力.對4例標本的前三代MSCs在體外利用TGF-β1和維生素C誘導兩週後,用RT-PCR證明MSCs錶達軟骨特異性的Ⅱ型前膠原的mRNA,說明培養的細胞具有嚮成軟骨樣細胞分化的潛能,由此進一步證實其為MSCs.
종인골수중분리화배양간충질간세포(MSCs),재원대화전대배양중기형태학상균위첩벽、섬유상적세포,수착대차적증가세포형태경가추우일치.류식세포의감정CD45、CD34、CD117、HLA-DR음성,CD29、CD166양성,병수착배양대차적증가,양성비솔화음성비솔출현상응적상승화강저,설명세포중MSCs순도증가.제삼대세포대약유80%처우G0/G1기,S+G2+M기약20%,설명MSCs유강대적증식잠능.재전대배양중적최괄접충밀도위5 000개/cm2좌우.MSCs재체외경력료체완기、대수생장기、평은기3개시기,전대배양적MSCs생장속도비원대적MSCs명현쾌흔다.채용정서강온법대MSCs진행동존,60～90 d후대동존적MSCs진행복소,발현MSCs잉가재체외량호생장4～6대,특정적MSCs양본가이확증10대,설명경과동존적세포잉구유량호적증식능력.대4례표본적전삼대MSCs재체외이용TGF-β1화유생소C유도량주후,용RT-PCR증명MSCs표체연골특이성적Ⅱ형전효원적mRNA,설명배양적세포구유향성연골양세포분화적잠능,유차진일보증실기위MSCs.
