微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
6期
766-770
,共5页
孙晶%李景鹏%王敖全%唐国敏%王华明
孫晶%李景鵬%王敖全%唐國敏%王華明
손정%리경붕%왕오전%당국민%왕화명
黑曲霉%pepB基因缺失%同源重组%外源蛋白
黑麯黴%pepB基因缺失%同源重組%外源蛋白
흑곡매%pepB기인결실%동원중조%외원단백
以黑曲霉(Aspergillus niger)GICC2773基因组DNA为模板,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约1.4kb和下游约1.3kb两段DNA序列,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表达单元的5′和3′端,构建成重组质粒pMW1-pepB,用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因.同源重组则采用原生质体-PEG方法,将酶切pMW1-pepB得到的线性片段转化A.niger GICC2773菌株,通过潮霉素选择平板得到62个Hgy抗性转化子,然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB29.功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降,外源蛋白漆酶的分泌表达有所提高.
以黑麯黴(Aspergillus niger)GICC2773基因組DNA為模闆,用PCR方法分彆擴增pepB基因中的上遊約1.4kb和下遊約1.3kb兩段DNA序列,將此兩段序列按同一方嚮分彆插入質粒pMW1中潮黴素抗性基因(hph)錶達單元的5′和3′耑,構建成重組質粒pMW1-pepB,用于通過同源重組靶嚮破壞基因組中的pepB基因.同源重組則採用原生質體-PEG方法,將酶切pMW1-pepB得到的線性片段轉化A.niger GICC2773菌株,通過潮黴素選擇平闆得到62箇Hgy抗性轉化子,然後採用PCR方法從這些抗性轉化子中篩選到1箇由于同源重組產生的pepB基因缺失突變菌株pepB29.功能分析顯示該突變株的痠性蛋白酶活性有明顯下降,外源蛋白漆酶的分泌錶達有所提高.
이흑곡매(Aspergillus niger)GICC2773기인조DNA위모판,용PCR방법분별확증pepB기인중적상유약1.4kb화하유약1.3kb량단DNA서렬,장차량단서렬안동일방향분별삽입질립pMW1중조매소항성기인(hph)표체단원적5′화3′단,구건성중조질립pMW1-pepB,용우통과동원중조파향파배기인조중적pepB기인.동원중조칙채용원생질체-PEG방법,장매절pMW1-pepB득도적선성편단전화A.niger GICC2773균주,통과조매소선택평판득도62개Hgy항성전화자,연후채용PCR방법종저사항성전화자중사선도1개유우동원중조산생적pepB기인결실돌변균주pepB29.공능분석현시해돌변주적산성단백매활성유명현하강,외원단백칠매적분비표체유소제고.
