临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
臨床耳鼻嚥喉頭頸外科雜誌
림상이비인후두경외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL OTORHINOLARYNGOLOGY HEAD AND NECK SURGERY
2007年
12期
552-554
,共3页
滕博%辛丁%文莲姬%崔树勋%金春顺
滕博%辛丁%文蓮姬%崔樹勛%金春順
등박%신정%문련희%최수훈%금춘순
喉肿瘤%脱氧核酶%eIF4E基因%基因治疗
喉腫瘤%脫氧覈酶%eIF4E基因%基因治療
후종류%탈양핵매%eIF4E기인%기인치료
目的:在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶(DNAzyme)成为新型喉癌基因治疗药物的可能性.方法:设计合成针对原癌基因eIF4EmRNA编码区的1059位点的10-23DNAzyme,并对其进行硫代磷酸化修饰,经脂质体转染Hep-2细胞,倒置相差荧光显微镜观察Hep-2细胞对5-FAM荧光素标记10-23DNAzyme的摄取,流式细胞仪计算转染效率,半定量RT-PCR、western blot观察其对喉癌eIF4E基因表达的抑制效应.结果:倒置相差荧光显微镜观察在转染12、24、36、48 h后,阳性转染的细胞均可发出绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率分别为60%、85%、90%、89%;修饰的10-23DNAzyme作用于Hep-2细胞后可显著抑制eIF4E基因的表达, 明显低于作为对照的转染空脂质体组和Hep-2细胞组(均P＜0.05).结论:经过硫代化修饰的10-23DNAzyme在细胞水平上能高效阻断eIF4E基因的表达,是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂.
目的:在細胞水平上探討10-23脫氧覈酶(DNAzyme)成為新型喉癌基因治療藥物的可能性.方法:設計閤成針對原癌基因eIF4EmRNA編碼區的1059位點的10-23DNAzyme,併對其進行硫代燐痠化脩飾,經脂質體轉染Hep-2細胞,倒置相差熒光顯微鏡觀察Hep-2細胞對5-FAM熒光素標記10-23DNAzyme的攝取,流式細胞儀計算轉染效率,半定量RT-PCR、western blot觀察其對喉癌eIF4E基因錶達的抑製效應.結果:倒置相差熒光顯微鏡觀察在轉染12、24、36、48 h後,暘性轉染的細胞均可髮齣綠色熒光,流式細胞儀檢測轉染效率分彆為60%、85%、90%、89%;脩飾的10-23DNAzyme作用于Hep-2細胞後可顯著抑製eIF4E基因的錶達, 明顯低于作為對照的轉染空脂質體組和Hep-2細胞組(均P＜0.05).結論:經過硫代化脩飾的10-23DNAzyme在細胞水平上能高效阻斷eIF4E基因的錶達,是一種高度特異性的、高效的基因治療劑.
목적:재세포수평상탐토10-23탈양핵매(DNAzyme)성위신형후암기인치료약물적가능성.방법:설계합성침대원암기인eIF4EmRNA편마구적1059위점적10-23DNAzyme,병대기진행류대린산화수식,경지질체전염Hep-2세포,도치상차형광현미경관찰Hep-2세포대5-FAM형광소표기10-23DNAzyme적섭취,류식세포의계산전염효솔,반정량RT-PCR、western blot관찰기대후암eIF4E기인표체적억제효응.결과:도치상차형광현미경관찰재전염12、24、36、48 h후,양성전염적세포균가발출록색형광,류식세포의검측전염효솔분별위60%、85%、90%、89%;수식적10-23DNAzyme작용우Hep-2세포후가현저억제eIF4E기인적표체, 명현저우작위대조적전염공지질체조화Hep-2세포조(균P＜0.05).결론:경과류대화수식적10-23DNAzyme재세포수평상능고효조단eIF4E기인적표체,시일충고도특이성적、고효적기인치료제.
