华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2009年
1期
6-8,27
,共4页
孙仁虎%李疆%崔静%吕清%刘兴华%王国斌
孫仁虎%李疆%崔靜%呂清%劉興華%王國斌
손인호%리강%최정%려청%류흥화%왕국빈
RNA干扰%短发卡RNA%趋化因子%CCR7
RNA榦擾%短髮卡RNA%趨化因子%CCR7
RNA간우%단발잡RNA%추화인자%CCR7
目的 设计并构建靶向 CCR7 基因 shRNA真核表达质粒,并检测其干扰效果.方法 以 CCR7 为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pGC-silencer-CRM30 载体,构建的3条重组短发夹shRNA表达载体分别命名为pGC-silencer-CRM30-CCR7 A、-CCR7 B 和-CCR7 C.采用测序法鉴定寡核苷酸序列.将构建好的真核表达载体转染人结肠癌SW480 细胞,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR法检测CCR7干扰效率.结果 重组质粒测序结果 与Genebank中的CCR7 cDNA序列相符,转染SW480细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白,RT-PCR结果 表明,pGC-silencer-CRM30-CCR7 C干扰效果最强.结论 靶向CCR7 基因shRNA表达载体构建无误,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在胃肠道恶性肿瘤生物学行为中的作用奠定了基础.
目的 設計併構建靶嚮 CCR7 基因 shRNA真覈錶達質粒,併檢測其榦擾效果.方法 以 CCR7 為靶基因設計具有短髮夾結構的模闆寡覈苷痠,退火形成互補雙鏈結構,再剋隆至pGC-silencer-CRM30 載體,構建的3條重組短髮夾shRNA錶達載體分彆命名為pGC-silencer-CRM30-CCR7 A、-CCR7 B 和-CCR7 C.採用測序法鑒定寡覈苷痠序列.將構建好的真覈錶達載體轉染人結腸癌SW480 細胞,熒光顯微鏡觀察轉染效果,RT-PCR法檢測CCR7榦擾效率.結果 重組質粒測序結果 與Genebank中的CCR7 cDNA序列相符,轉染SW480細胞後,熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光蛋白,RT-PCR結果 錶明,pGC-silencer-CRM30-CCR7 C榦擾效果最彊.結論 靶嚮CCR7 基因shRNA錶達載體構建無誤,為進一步探討趨化因子受體CCR7在胃腸道噁性腫瘤生物學行為中的作用奠定瞭基礎.
목적 설계병구건파향 CCR7 기인 shRNA진핵표체질립,병검측기간우효과.방법 이 CCR7 위파기인설계구유단발협결구적모판과핵감산,퇴화형성호보쌍련결구,재극륭지pGC-silencer-CRM30 재체,구건적3조중조단발협shRNA표체재체분별명명위pGC-silencer-CRM30-CCR7 A、-CCR7 B 화-CCR7 C.채용측서법감정과핵감산서렬.장구건호적진핵표체재체전염인결장암SW480 세포,형광현미경관찰전염효과,RT-PCR법검측CCR7간우효솔.결과 중조질립측서결과 여Genebank중적CCR7 cDNA서렬상부,전염SW480세포후,형광현미경하가관찰도록색형광단백,RT-PCR결과 표명,pGC-silencer-CRM30-CCR7 C간우효과최강.결론 파향CCR7 기인shRNA표체재체구건무오,위진일보탐토추화인자수체CCR7재위장도악성종류생물학행위중적작용전정료기출.
