高校化学工程学报
高校化學工程學報
고교화학공정학보
JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING OF CHINESE UNIVERSITIES
2011年
2期
283-288
,共6页
酯酶%手性选择性%定向进化%易错PCR%高通量筛选
酯酶%手性選擇性%定嚮進化%易錯PCR%高通量篩選
지매%수성선택성%정향진화%역착PCR%고통량사선
对菌株Rhodobacter sphaeroides的RSP-2728酯酶基因进行立体选择性定向进化研究,建立了有效的定向进化策略,以及通过扁桃酸甲酯水解反应所产生的酸根离子浓度来监测酶活的高通量筛选方法.利用易错PCR技术,进行了三轮突变,获得了突变株A6A5,B7F11和C8G1,对映体选择性(E值)从3.13分别提高到5.32,8.77和14.01;提高了1.7倍,2.8倍和4.5倍.序列分析表明,突变体A6A5有一个62位上的氨基酸发生了改变,由原先的天冬酰胺变成了酪氨酸;突变体B7F11的62位的天冬酰胺变成了酪氨酸,145位上的亮氨酸变成了组氨酸;突变体C8G1的62位的天冬酰胺变成了半胱氨酸,145位的亮氨酸变为组氨酸.利用定向进化策略能够有效地提高酶的立体选择性.
對菌株Rhodobacter sphaeroides的RSP-2728酯酶基因進行立體選擇性定嚮進化研究,建立瞭有效的定嚮進化策略,以及通過扁桃痠甲酯水解反應所產生的痠根離子濃度來鑑測酶活的高通量篩選方法.利用易錯PCR技術,進行瞭三輪突變,穫得瞭突變株A6A5,B7F11和C8G1,對映體選擇性(E值)從3.13分彆提高到5.32,8.77和14.01;提高瞭1.7倍,2.8倍和4.5倍.序列分析錶明,突變體A6A5有一箇62位上的氨基痠髮生瞭改變,由原先的天鼕酰胺變成瞭酪氨痠;突變體B7F11的62位的天鼕酰胺變成瞭酪氨痠,145位上的亮氨痠變成瞭組氨痠;突變體C8G1的62位的天鼕酰胺變成瞭半胱氨痠,145位的亮氨痠變為組氨痠.利用定嚮進化策略能夠有效地提高酶的立體選擇性.
대균주Rhodobacter sphaeroides적RSP-2728지매기인진행입체선택성정향진화연구,건립료유효적정향진화책략,이급통과편도산갑지수해반응소산생적산근리자농도래감측매활적고통량사선방법.이용역착PCR기술,진행료삼륜돌변,획득료돌변주A6A5,B7F11화C8G1,대영체선택성(E치)종3.13분별제고도5.32,8.77화14.01;제고료1.7배,2.8배화4.5배.서렬분석표명,돌변체A6A5유일개62위상적안기산발생료개변,유원선적천동선알변성료락안산;돌변체B7F11적62위적천동선알변성료락안산,145위상적량안산변성료조안산;돌변체C8G1적62위적천동선알변성료반광안산,145위적량안산변위조안산.이용정향진화책략능구유효지제고매적입체선택성.
