中华临床医师杂志(电子版)
中華臨床醫師雜誌(電子版)
중화림상의사잡지(전자판)
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2011年
7期
1906-1911
,共6页
朱小玉%朱薇波%张祥忠%周育森%陈嘉瑜%孙自敏%陈运贤
硃小玉%硃薇波%張祥忠%週育森%陳嘉瑜%孫自敏%陳運賢
주소옥%주미파%장상충%주육삼%진가유%손자민%진운현
肝细胞生长因子%绿色荧光蛋白质类%腺病毒,人%基因疗法
肝細胞生長因子%綠色熒光蛋白質類%腺病毒,人%基因療法
간세포생장인자%록색형광단백질류%선병독,인%기인요법
目的 构建一种同时携带人肝细胞生长因子(hHGF)及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒重组体,为hHGF的基因治疗提供实验基础.方法 对重组质粒pcDNA3-hHGF进行酶切鉴定及测序正确后,酶切获得hHGF,亚克隆至带有GFP 标记的穿梭质粒pAdTrack-CMV上.选取hHGF 正向插入的重组穿梭质粒经PmeⅠ充分线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1 在大肠杆菌BJ5183 中同源重组,挑取阳性克隆行PCR 及酶切鉴定.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体转染HEK293 细胞进行包装并扩增获取重组病毒上清,RT-PCR 及Western Blot 方法检测hHGF 的表达.结果 目的基因的测序结果与Genebank上的hHGF序列一致.hHGF 基因插入重组腺病毒载体的预期位置,感染Ad-hHGF的HEK293细胞中可检测到hHGF mRNA 和蛋白的表达.结论 成功构建了同时携带hHGF和GFP的重组腺病毒表达载体Ad-hHGF,为进一步探讨hHGF 的生物学功能提供了实验依据.
目的 構建一種同時攜帶人肝細胞生長因子(hHGF)及綠色熒光蛋白(GFP)的腺病毒重組體,為hHGF的基因治療提供實驗基礎.方法 對重組質粒pcDNA3-hHGF進行酶切鑒定及測序正確後,酶切穫得hHGF,亞剋隆至帶有GFP 標記的穿梭質粒pAdTrack-CMV上.選取hHGF 正嚮插入的重組穿梭質粒經PmeⅠ充分線性化後,與骨架質粒pAdEasy-1 在大腸桿菌BJ5183 中同源重組,挑取暘性剋隆行PCR 及酶切鑒定.重組病毒質粒用PacⅠ酶切線性化後,脂質體轉染HEK293 細胞進行包裝併擴增穫取重組病毒上清,RT-PCR 及Western Blot 方法檢測hHGF 的錶達.結果 目的基因的測序結果與Genebank上的hHGF序列一緻.hHGF 基因插入重組腺病毒載體的預期位置,感染Ad-hHGF的HEK293細胞中可檢測到hHGF mRNA 和蛋白的錶達.結論 成功構建瞭同時攜帶hHGF和GFP的重組腺病毒錶達載體Ad-hHGF,為進一步探討hHGF 的生物學功能提供瞭實驗依據.
목적 구건일충동시휴대인간세포생장인자(hHGF)급록색형광단백(GFP)적선병독중조체,위hHGF적기인치료제공실험기출.방법 대중조질립pcDNA3-hHGF진행매절감정급측서정학후,매절획득hHGF,아극륭지대유GFP 표기적천사질립pAdTrack-CMV상.선취hHGF 정향삽입적중조천사질립경PmeⅠ충분선성화후,여골가질립pAdEasy-1 재대장간균BJ5183 중동원중조,도취양성극륭행PCR 급매절감정.중조병독질립용PacⅠ매절선성화후,지질체전염HEK293 세포진행포장병확증획취중조병독상청,RT-PCR 급Western Blot 방법검측hHGF 적표체.결과 목적기인적측서결과여Genebank상적hHGF서렬일치.hHGF 기인삽입중조선병독재체적예기위치,감염Ad-hHGF적HEK293세포중가검측도hHGF mRNA 화단백적표체.결론 성공구건료동시휴대hHGF화GFP적중조선병독표체재체Ad-hHGF,위진일보탐토hHGF 적생물학공능제공료실험의거.
