基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2011年
6期
615-620
,共6页
γδT细胞受体%M2型丙酮酸激酶%γδT细胞
γδT細胞受體%M2型丙酮痠激酶%γδT細胞
γδT세포수체%M2형병동산격매%γδT세포
目的 检验M2型丙酮酸激酶(PKM2)是否是肿瘤细胞表面TCRγδ识别的配体.方法 用Western blot的方法验证OT3肽(合成的TCRγδ中δ链的CDR3区肽)与PKM2结合,用Western blot及免疫组化法观察PKM2在肿瘤细胞及组织中的表达,用流式细胞术及激光扫描共聚焦显微镜术验证PKM2在肿瘤细胞的定位,用固相化PKM2体外扩增γδT细胞和PKM2刺激γδT细胞分泌IFN-γ的实验检验PKM2的功能.结果 (1)PKM2可与OT3肽结合,肿瘤细胞总蛋白提取物中含有大量PKM2,提示以OT3为探针,从肿瘤细胞总蛋白提取物中钓取到PKM2是合理的,用此方法筛选OT3结合蛋白的方法是可行的;(2)PKM2普遍表达于肿瘤细胞及组织,但不表达于肿瘤细胞膜;(3)PKM2在体外不能扩增γδT细胞,无刺激γδT细胞产生IFN-γ的功能.结论 PKM2不表达于肿瘤细胞表面,对γδT细胞不具有刺激活化的功能,PKM2不具备TCRγδ的配体特性.
目的 檢驗M2型丙酮痠激酶(PKM2)是否是腫瘤細胞錶麵TCRγδ識彆的配體.方法 用Western blot的方法驗證OT3肽(閤成的TCRγδ中δ鏈的CDR3區肽)與PKM2結閤,用Western blot及免疫組化法觀察PKM2在腫瘤細胞及組織中的錶達,用流式細胞術及激光掃描共聚焦顯微鏡術驗證PKM2在腫瘤細胞的定位,用固相化PKM2體外擴增γδT細胞和PKM2刺激γδT細胞分泌IFN-γ的實驗檢驗PKM2的功能.結果 (1)PKM2可與OT3肽結閤,腫瘤細胞總蛋白提取物中含有大量PKM2,提示以OT3為探針,從腫瘤細胞總蛋白提取物中釣取到PKM2是閤理的,用此方法篩選OT3結閤蛋白的方法是可行的;(2)PKM2普遍錶達于腫瘤細胞及組織,但不錶達于腫瘤細胞膜;(3)PKM2在體外不能擴增γδT細胞,無刺激γδT細胞產生IFN-γ的功能.結論 PKM2不錶達于腫瘤細胞錶麵,對γδT細胞不具有刺激活化的功能,PKM2不具備TCRγδ的配體特性.
목적 검험M2형병동산격매(PKM2)시부시종류세포표면TCRγδ식별적배체.방법 용Western blot적방법험증OT3태(합성적TCRγδ중δ련적CDR3구태)여PKM2결합,용Western blot급면역조화법관찰PKM2재종류세포급조직중적표체,용류식세포술급격광소묘공취초현미경술험증PKM2재종류세포적정위,용고상화PKM2체외확증γδT세포화PKM2자격γδT세포분비IFN-γ적실험검험PKM2적공능.결과 (1)PKM2가여OT3태결합,종류세포총단백제취물중함유대량PKM2,제시이OT3위탐침,종종류세포총단백제취물중조취도PKM2시합리적,용차방법사선OT3결합단백적방법시가행적;(2)PKM2보편표체우종류세포급조직,단불표체우종류세포막;(3)PKM2재체외불능확증γδT세포,무자격γδT세포산생IFN-γ적공능.결론 PKM2불표체우종류세포표면,대γδT세포불구유자격활화적공능,PKM2불구비TCRγδ적배체특성.
