农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
495-500
,共6页
金永%袁建龙%朱兵%郭旭东%刘东军
金永%袁建龍%硃兵%郭旭東%劉東軍
금영%원건룡%주병%곽욱동%류동군
绒山羊%卵母细胞%孤雌激活%胚胎发育
絨山羊%卵母細胞%孤雌激活%胚胎髮育
융산양%란모세포%고자격활%배태발육
为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟.将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7%乙醇+CHX处理,体外发育48 h后统计卵裂率、8-cell率,7～9 d后统计囊胚率和囊胚细胞数.结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.6±4.9%)显著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)及7%乙醇+CHX(97.5±1.4%)处理组(P＜0.05),而与7%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(81.3±5.8%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8%)、7%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1%)及7%乙醇+CHX(62.5±2.2%)处理组(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)处理组的囊胚率显著高于7%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)及7%乙醇+CHX(8.8±2.5%)处理组(P＜0.05);囊胚细胞数(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8个)各组间没有明显差异)(P＞0.05).利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和CHX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量.IA23187或Ionomycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激活等相关研究提供了借鉴.
為瞭進一步探索絨山羊卵母細胞孤雌髮育的方法,進而為絨山羊的體細胞覈移植技術提供高效的體外激活方法,本實驗以屠宰場絨山羊卵巢為材料,採用切割法收集卵母細胞,併進行體外成熟.將體外成熟的卵母細胞分彆經IA23187+6-DMAP、離子黴素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7%乙醇+6-DMAP、IA23187+放線菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7%乙醇+CHX處理,體外髮育48 h後統計卵裂率、8-cell率,7～9 d後統計囊胚率和囊胚細胞數.結果錶明,IA23187+6-DMAP處理組的卵裂率(89.6±4.9%)顯著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)及7%乙醇+CHX(97.5±1.4%)處理組(P＜0.05),而與7%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5%)處理組沒有顯著差異;IA23187+CHX(81.3±5.8%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)處理組的8-細胞率顯著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8%)、7%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1%)及7%乙醇+CHX(62.5±2.2%)處理組(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)處理組的囊胚率顯著高于7%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)及7%乙醇+CHX(8.8±2.5%)處理組(P＜0.05);囊胚細胞數(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8箇)各組間沒有明顯差異)(P＞0.05).利用IA23187、Ionomycin及乙醇聯閤6-DMAP和CHX,對山羊卵母細胞進行激活均能穫得較高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇與CHX聯閤激活處理組可穫得較高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP處理組穫得較高的囊胚率,不同處理組的囊胚均具有較高的細胞數量.IA23187或Ionomycin聯閤6-DMAP是激活山羊卵母細胞最適方法,是體細胞覈移植技術過程中的較為高效的體外激活方法,該研究結果為山羊卵母細胞孤雌髮育及體外激活等相關研究提供瞭藉鑒.
위료진일보탐색융산양란모세포고자발육적방법,진이위융산양적체세포핵이식기술제공고효적체외격활방법,본실험이도재장융산양란소위재료,채용절할법수집란모세포,병진행체외성숙.장체외성숙적란모세포분별경IA23187+6-DMAP、리자매소(Ionomycin)+6-이갑기안기표령(6-DMAP)、7%을순+6-DMAP、IA23187+방선균동(CHX)、Ionomycin+CHX、7%을순+CHX처리,체외발육48 h후통계란렬솔、8-cell솔,7～9 d후통계낭배솔화낭배세포수.결과표명,IA23187+6-DMAP처리조적란렬솔(89.6±4.9%)현저저우Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)급7%을순+CHX(97.5±1.4%)처리조(P＜0.05),이여7%을순+6-DMAP(96.3±0.5%)처리조몰유현저차이;IA23187+CHX(81.3±5.8%)화Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)처리조적8-세포솔현저고우IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8%)、7%을순+6-DMAP(38.2±2.1%)급7%을순+CHX(62.5±2.2%)처리조(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)화Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)처리조적낭배솔현저고우7%을순+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)급7%을순+CHX(8.8±2.5%)처리조(P＜0.05);낭배세포수(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2화177.6±20.8개)각조간몰유명현차이)(P＞0.05).이용IA23187、Ionomycin급을순연합6-DMAP화CHX,대산양란모세포진행격활균능획득교고적란렬솔,IA23187、Ionomycin급을순여CHX연합격활처리조가획득교고적8-cell솔,IA23187+6-DMAP화Ionomycin+6-DMAP처리조획득교고적낭배솔,불동처리조적낭배균구유교고적세포수량.IA23187혹Ionomycin연합6-DMAP시격활산양란모세포최괄방법,시체세포핵이식기술과정중적교위고효적체외격활방법,해연구결과위산양란모세포고자발육급체외격활등상관연구제공료차감.
