生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
30-34
,共5页
李晓晓%徐舒%李慧%宫夏霓%徐志卿
李曉曉%徐舒%李慧%宮夏霓%徐誌卿
리효효%서서%리혜%궁하예%서지경
小鼠甘丙肽1型受体( mGalR1)%基因克隆%真核表达载体%HEK293A细胞%内在化
小鼠甘丙肽1型受體( mGalR1)%基因剋隆%真覈錶達載體%HEK293A細胞%內在化
소서감병태1형수체( mGalR1)%기인극륭%진핵표체재체%HEK293A세포%내재화
目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体( mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化.方法:应用RT - PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽Ⅰ型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP - N1真核表达载体；mGalR1 - pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况.结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1047bp,共编码348个氨基酸；共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆.结论:成功构建真核表达载体mGalR1 - pEGFP并在HEK293A中表达；在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象.
目的:剋隆小鼠甘丙肽1型受體( mGalR1)基因,構建其真覈錶達載體,併觀察該基因在HEK293A細胞中的錶達和內化.方法:應用RT - PCR方法,以小鼠下丘腦RNA為模闆,擴增穫得甘丙肽Ⅰ型受體(mGalR1)基因併定嚮剋隆到pEGFP - N1真覈錶達載體；mGalR1 - pEGFP錶達載體瞬時轉染HEK293A細胞,利用激光共聚焦顯微技術觀察mGalR1在給予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激時的內化情況.結果:剋隆得到正確的mGalR1基因全長序列,其cDNA為1047bp,共編碼348箇氨基痠；共聚焦顯微鏡結果錶明mGalR1主要在膜上錶達,經甘丙肽刺激5～15min後受體下膜進入胞漿.結論:成功構建真覈錶達載體mGalR1 - pEGFP併在HEK293A中錶達；在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受體存在內化現象.
목적:극륭소서감병태1형수체( mGalR1)기인,구건기진핵표체재체,병관찰해기인재HEK293A세포중적표체화내화.방법:응용RT - PCR방법,이소서하구뇌RNA위모판,확증획득감병태Ⅰ형수체(mGalR1)기인병정향극륭도pEGFP - N1진핵표체재체；mGalR1 - pEGFP표체재체순시전염HEK293A세포,이용격광공취초현미기술관찰mGalR1재급여감병태(10-7mol/L)0、5、10、15min자격시적내화정황.결과:극륭득도정학적mGalR1기인전장서렬,기cDNA위1047bp,공편마348개안기산；공취초현미경결과표명mGalR1주요재막상표체,경감병태자격5～15min후수체하막진입포장.결론:성공구건진핵표체재체mGalR1 - pEGFP병재HEK293A중표체；재감병태자격하소서감병태1형수체존재내화현상.
