中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2012年
2期
291-293
,共3页
李宝善%王艳娇%马厚勋%吴平
李寶善%王豔嬌%馬厚勛%吳平
리보선%왕염교%마후훈%오평
Klotho%基因克隆%腺相关病毒%载体构建%病毒包装
Klotho%基因剋隆%腺相關病毒%載體構建%病毒包裝
Klotho%기인극륭%선상관병독%재체구건%병독포장
目的 克隆编码小鼠膜型Klotho (mKL)蛋白的cDNA片段,构建、包装Klotho重组腺相关病毒表达体系,并检测rAAV/mKL载体表达功能.方法 选择RT-PCR扩增小鼠全长mKL蛋白的基因片段,将该片段亚克隆至腺相关病毒载体pAAV-IRES-hnGFP,采用酶切及DNA测序鉴定；利用AAV-293细胞包装rAAV/mKL,经转染7901细胞,检测其Klotho表达情况.结果 本文成功克隆出序列信息和读码框完全正确的3 064 bp的小鼠Klotho基因片段,并构建pAAV/mKL克隆.在AAV-293细胞中包装出rAAV/mKL,病毒原液转染7901细胞后其Klotho mRNA表达上调,而细胞上清液Klotho蛋白也明显增加(P＜0.o1).结论 成功构建小鼠Klotho重组腺相关病毒载体(pAAV/mKL),获得了rAAV/mKL,并经转染7901细胞验证其基因表达功能正常,这就为进一步研究Klotho基因治疗衰老相关性疾病提供了技术基础.
目的 剋隆編碼小鼠膜型Klotho (mKL)蛋白的cDNA片段,構建、包裝Klotho重組腺相關病毒錶達體繫,併檢測rAAV/mKL載體錶達功能.方法 選擇RT-PCR擴增小鼠全長mKL蛋白的基因片段,將該片段亞剋隆至腺相關病毒載體pAAV-IRES-hnGFP,採用酶切及DNA測序鑒定；利用AAV-293細胞包裝rAAV/mKL,經轉染7901細胞,檢測其Klotho錶達情況.結果 本文成功剋隆齣序列信息和讀碼框完全正確的3 064 bp的小鼠Klotho基因片段,併構建pAAV/mKL剋隆.在AAV-293細胞中包裝齣rAAV/mKL,病毒原液轉染7901細胞後其Klotho mRNA錶達上調,而細胞上清液Klotho蛋白也明顯增加(P＜0.o1).結論 成功構建小鼠Klotho重組腺相關病毒載體(pAAV/mKL),穫得瞭rAAV/mKL,併經轉染7901細胞驗證其基因錶達功能正常,這就為進一步研究Klotho基因治療衰老相關性疾病提供瞭技術基礎.
목적 극륭편마소서막형Klotho (mKL)단백적cDNA편단,구건、포장Klotho중조선상관병독표체체계,병검측rAAV/mKL재체표체공능.방법 선택RT-PCR확증소서전장mKL단백적기인편단,장해편단아극륭지선상관병독재체pAAV-IRES-hnGFP,채용매절급DNA측서감정；이용AAV-293세포포장rAAV/mKL,경전염7901세포,검측기Klotho표체정황.결과 본문성공극륭출서렬신식화독마광완전정학적3 064 bp적소서Klotho기인편단,병구건pAAV/mKL극륭.재AAV-293세포중포장출rAAV/mKL,병독원액전염7901세포후기Klotho mRNA표체상조,이세포상청액Klotho단백야명현증가(P＜0.o1).결론 성공구건소서Klotho중조선상관병독재체(pAAV/mKL),획득료rAAV/mKL,병경전염7901세포험증기기인표체공능정상,저취위진일보연구Klotho기인치료쇠로상관성질병제공료기술기출.
