中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2012年
10期
815-818
,共4页
吴海珍%刘宁宁%张璐%吕军华%肖一红%周恩民
吳海珍%劉寧寧%張璐%呂軍華%肖一紅%週恩民
오해진%류저저%장로%려군화%초일홍%주은민
猪繁殖与呼吸综合征病毒%非肌肉肌球蛋白Ⅱ型A重链羧基端%单克隆抗体%特性鉴定
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%非肌肉肌毬蛋白Ⅱ型A重鏈羧基耑%單剋隆抗體%特性鑒定
저번식여호흡종합정병독%비기육기구단백Ⅱ형A중련최기단%단극륭항체%특성감정
为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-Ⅱ A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合.ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域.结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc- 145细胞；western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合.该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础.
為製備非肌肉肌毬蛋白Ⅱ型重鏈A(NMHC-Ⅱ A)的單剋隆抗體(MAb),本研究將編碼NMHC-Ⅱ A羧基耑1 651～1 960氨基痠的錶達重組質粒轉化到大腸桿菌感受態細胞Rosseta中誘導錶達,重組蛋白純化後免疫BALB/c小鼠,分離小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞用PEG 4000介導融閤.ELISA方法檢測篩選暘性雜交瘤細胞,製備腹水併純化MAb,以間接免疫熒光和免疫沉澱方法鑒定MAb的特異性,western blot檢測MAb靶位點區域.結果錶明,通過篩選得到1株穩定分泌抗體的雜交瘤細胞繫,其抗體亞型為IgG1,細胞培養上清和腹水效價分彆為1∶2560和1∶1.0×106;該MAb能夠特異性結閤相應抗原,併結閤Marc- 145細胞；western blot結果顯示該抗體與NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基痠位點結閤.該抗體的製備為研究NMHC-Ⅱ A在豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒感染細胞中的作用奠定瞭基礎.
위제비비기육기구단백Ⅱ형중련A(NMHC-Ⅱ A)적단극륭항체(MAb),본연구장편마NMHC-Ⅱ A최기단1 651～1 960안기산적표체중조질립전화도대장간균감수태세포Rosseta중유도표체,중조단백순화후면역BALB/c소서,분리소서비세포여SP2/0골수류세포용PEG 4000개도융합.ELISA방법검측사선양성잡교류세포,제비복수병순화MAb,이간접면역형광화면역침정방법감정MAb적특이성,western blot검측MAb파위점구역.결과표명,통과사선득도1주은정분비항체적잡교류세포계,기항체아형위IgG1,세포배양상청화복수효개분별위1∶2560화1∶1.0×106;해MAb능구특이성결합상응항원,병결합Marc- 145세포；western blot결과현시해항체여NMHC-Ⅱ A적1 812～1 894안기산위점결합.해항체적제비위연구NMHC-Ⅱ A재저번식여호흡종합정병독감염세포중적작용전정료기출.
