微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2006年
2期
10-15
,共6页
袁盛凌%王芃%刘向昕%王艳春%展德文%张兆山
袁盛凌%王芃%劉嚮昕%王豔春%展德文%張兆山
원성릉%왕봉%류향흔%왕염춘%전덕문%장조산
λ-Red重组系统%抗药性基因%平衡致死系统
λ-Red重組繫統%抗藥性基因%平衡緻死繫統
λ-Red중조계통%항약성기인%평형치사계통
质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性.利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中.但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39nt cat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换.
質粒pMM085是含有豬毒素源性大腸桿菌(ETEC)的黏附素K88與無毒腸毒素LTA-B+基因的重組質粒,含氯黴素抗性基因,由此構建的菌苗株帶有抗藥性.利用平衡緻死繫統改建此疫苗株,即將質粒上的氯黴素抗性基因cat替換成asd基因,併把新構建的質粒轉移到缺失asd基因的大腸桿菌X6097中.但由于質粒pMM085是一箇23kD的大質粒,傳統的基因工程操作不易進行,利用λ-Red重組繫統,將錶達Red重組蛋白的質粒pKD46轉化含pMM085的大腸桿菌X6097,併用兩耑各帶有39nt cat基因同源區、含全長asd基因的PCR產物電擊轉化此感受態細胞,在λ-Red重組繫統的幫助下,成功實現瞭asd基因對cat基因的置換.
질립pMM085시함유저독소원성대장간균(ETEC)적점부소K88여무독장독소LTA-B+기인적중조질립,함록매소항성기인,유차구건적균묘주대유항약성.이용평형치사계통개건차역묘주,즉장질립상적록매소항성기인cat체환성asd기인,병파신구건적질립전이도결실asd기인적대장간균X6097중.단유우질립pMM085시일개23kD적대질립,전통적기인공정조작불역진행,이용λ-Red중조계통,장표체Red중조단백적질립pKD46전화함pMM085적대장간균X6097,병용량단각대유39nt cat기인동원구、함전장asd기인적PCR산물전격전화차감수태세포,재λ-Red중조계통적방조하,성공실현료asd기인대cat기인적치환.
