南通医学院学报
南通醫學院學報
남통의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE NANTONG
2009年
3期
160-164
,共5页
杨世蕊%郁美香%雷陈%周游%刘庆梅%刘佳佳%王明华
楊世蕊%鬱美香%雷陳%週遊%劉慶梅%劉佳佳%王明華
양세예%욱미향%뢰진%주유%류경매%류가가%왕명화
PMP22CD%原核表达%多克隆抗体%聚合酶链反应%免疫抗原
PMP22CD%原覈錶達%多剋隆抗體%聚閤酶鏈反應%免疫抗原
PMP22CD%원핵표체%다극륭항체%취합매련반응%면역항원
目的:通过PCR克隆PMP22CD基因,构建原核表达载体PET-32a(+)/PMP22CD,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定基础.方法:通过PCR的方法克隆PMP22CD基因,选择抗原性较强的C-端,构建原核表达载体PET32a(+)/PMP22CD,在大肠杆菌BL21(DE3 Lysis)中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白以包涵体的形式存在,应用电洗脱的方式获得重组蛋白,免疫新西兰大白兔,获得抗血清,通过琼脂糖双扩和Western Blot检测抗血清效价和特异性.结果:经测序鉴定成功克隆PMP22CD基因,并构建PET-32a(+)/PMP22CD重组质粒,表达融合蛋白,免疫新西兰大白兔,获得PMP22CD多克隆抗体.结论:得到了纯化的PET-32a(+)/PMP22CD融合蛋白,获得了效价高、特异性强的抗体.
目的:通過PCR剋隆PMP22CD基因,構建原覈錶達載體PET-32a(+)/PMP22CD,錶達併純化蛋白,製備多剋隆抗體,為研究該基因的功能奠定基礎.方法:通過PCR的方法剋隆PMP22CD基因,選擇抗原性較彊的C-耑,構建原覈錶達載體PET32a(+)/PMP22CD,在大腸桿菌BL21(DE3 Lysis)中誘導錶達,SDS-PAGE分析重組蛋白以包涵體的形式存在,應用電洗脫的方式穫得重組蛋白,免疫新西蘭大白兔,穫得抗血清,通過瓊脂糖雙擴和Western Blot檢測抗血清效價和特異性.結果:經測序鑒定成功剋隆PMP22CD基因,併構建PET-32a(+)/PMP22CD重組質粒,錶達融閤蛋白,免疫新西蘭大白兔,穫得PMP22CD多剋隆抗體.結論:得到瞭純化的PET-32a(+)/PMP22CD融閤蛋白,穫得瞭效價高、特異性彊的抗體.
목적:통과PCR극륭PMP22CD기인,구건원핵표체재체PET-32a(+)/PMP22CD,표체병순화단백,제비다극륭항체,위연구해기인적공능전정기출.방법:통과PCR적방법극륭PMP22CD기인,선택항원성교강적C-단,구건원핵표체재체PET32a(+)/PMP22CD,재대장간균BL21(DE3 Lysis)중유도표체,SDS-PAGE분석중조단백이포함체적형식존재,응용전세탈적방식획득중조단백,면역신서란대백토,획득항혈청,통과경지당쌍확화Western Blot검측항혈청효개화특이성.결과:경측서감정성공극륭PMP22CD기인,병구건PET-32a(+)/PMP22CD중조질립,표체융합단백,면역신서란대백토,획득PMP22CD다극륭항체.결론:득도료순화적PET-32a(+)/PMP22CD융합단백,획득료효개고、특이성강적항체.
