西南农业学报
西南農業學報
서남농업학보
SOUTHWEST CHINA JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
3期
579-583
,共5页
覃迎姿%王爱勤%黄文静%杨丽涛%李杨瑞
覃迎姿%王愛勤%黃文靜%楊麗濤%李楊瑞
담영자%왕애근%황문정%양려도%리양서
甘蔗%eEF1A%反义转基因%遗传转化
甘蔗%eEF1A%反義轉基因%遺傳轉化
감자%eEF1A%반의전기인%유전전화
延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在核糖体催化氨基酸链延伸以及推动、控制蛋白质合成过程中起重要作用的蛋白质因子.利用RT-PCR技术扩增得到甘蔗eEF1A的编码区1420 bp的cDNA序列,反向连接到受体质粒pBI121载体中,构建含GUS基因的甘蔗eEF1A基因反义植物表达载体pBIantiEF.用冻融法将pBIantiEF导入根癌农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法,将eEF1A反义基因转化烟草K346.将获得的43株抗卡那霉素烟草经PCR筛选,得到38株呈阳性的反义转基因植株,阳性植株再经Dot-Southern杂交检测,证明eEF1A基因已整合进其中的34株烟草基因组中,平均转化率为79 %.反义转基因烟草植株移栽后表型出现不同程度的变异,叶片变厚,卷曲不能平展,叶背出现明显皱折,并外突成芽,茎、叶的伸长明显受阻,顶芽出现双芽,开花延迟.推测甘蔗延伸因子eEF1A可能与甘蔗茎、叶伸长生长和发育有关.
延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在覈糖體催化氨基痠鏈延伸以及推動、控製蛋白質閤成過程中起重要作用的蛋白質因子.利用RT-PCR技術擴增得到甘蔗eEF1A的編碼區1420 bp的cDNA序列,反嚮連接到受體質粒pBI121載體中,構建含GUS基因的甘蔗eEF1A基因反義植物錶達載體pBIantiEF.用凍融法將pBIantiEF導入根癌農桿菌菌株EHA105中,通過農桿菌介導法,將eEF1A反義基因轉化煙草K346.將穫得的43株抗卡那黴素煙草經PCR篩選,得到38株呈暘性的反義轉基因植株,暘性植株再經Dot-Southern雜交檢測,證明eEF1A基因已整閤進其中的34株煙草基因組中,平均轉化率為79 %.反義轉基因煙草植株移栽後錶型齣現不同程度的變異,葉片變厚,捲麯不能平展,葉揹齣現明顯皺摺,併外突成芽,莖、葉的伸長明顯受阻,頂芽齣現雙芽,開花延遲.推測甘蔗延伸因子eEF1A可能與甘蔗莖、葉伸長生長和髮育有關.
연신인자eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)시재핵당체최화안기산련연신이급추동、공제단백질합성과정중기중요작용적단백질인자.이용RT-PCR기술확증득도감자eEF1A적편마구1420 bp적cDNA서렬,반향련접도수체질립pBI121재체중,구건함GUS기인적감자eEF1A기인반의식물표체재체pBIantiEF.용동융법장pBIantiEF도입근암농간균균주EHA105중,통과농간균개도법,장eEF1A반의기인전화연초K346.장획득적43주항잡나매소연초경PCR사선,득도38주정양성적반의전기인식주,양성식주재경Dot-Southern잡교검측,증명eEF1A기인이정합진기중적34주연초기인조중,평균전화솔위79 %.반의전기인연초식주이재후표형출현불동정도적변이,협편변후,권곡불능평전,협배출현명현추절,병외돌성아,경、협적신장명현수조,정아출현쌍아,개화연지.추측감자연신인자eEF1A가능여감자경、협신장생장화발육유관.
