海洋与湖沼
海洋與湖沼
해양여호소
OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA
2009年
3期
289-295
,共7页
贺静静%李晔%李太武%苏秀榕%王孟前%李松伟%周军%马斌%李强芳
賀靜靜%李曄%李太武%囌秀榕%王孟前%李鬆偉%週軍%馬斌%李彊芳
하정정%리엽%리태무%소수용%왕맹전%리송위%주군%마빈%리강방
cDNA文库%序列分析%泥蚶%铁结合蛋白基因
cDNA文庫%序列分析%泥蚶%鐵結閤蛋白基因
cDNA문고%서렬분석%니감%철결합단백기인
取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率鉴定.结果表明原始文库的滴度为3.17×105 cfu/ml,重组率为86.3%,插入片段多在500-2500bp间.随机挑选458个克隆测序,经分析获得94种已知基因及87种未知基因.其中包括铁结合蛋白(Felrritin)的全长cDNA序列.该基因序列全长895bp,5'-端非编码区为163bp,3'-非编码区为213bp,开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸.推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa和4.89.氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%-82%.比对结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守.
取正常泥蚶肌肉組織穫得總RNA,純化mRNA後,利用含Sfi Ⅰ酶切位點的CDSⅢ引物逆轉錄閤成cDNA第一鏈,通過LD-PCR閤成cDNA雙鏈,經膠迴收除去短片段,與pDNR-LIB載體進行連接,電轉化到大腸桿菌DH10B中,構建形成原始文庫,進行滴度測試和重組率鑒定.結果錶明原始文庫的滴度為3.17×105 cfu/ml,重組率為86.3%,插入片段多在500-2500bp間.隨機挑選458箇剋隆測序,經分析穫得94種已知基因及87種未知基因.其中包括鐵結閤蛋白(Felrritin)的全長cDNA序列.該基因序列全長895bp,5'-耑非編碼區為163bp,3'-非編碼區為213bp,開放閱讀框為519bp,編碼172箇氨基痠.推測其蛋白分子量和等電點分彆為20kDa和4.89.氨基痠序列與皺紋盤鮑、太平洋牡蠣、血紅扇頭蜱、文昌魚、中華蟾蜍、非洲爪蟾、小傢鼠以及人等的同源性有62%-82%.比對結果錶明,鐵結閤蛋白基因在動物進化中高度保守.
취정상니감기육조직획득총RNA,순화mRNA후,이용함Sfi Ⅰ매절위점적CDSⅢ인물역전록합성cDNA제일련,통과LD-PCR합성cDNA쌍련,경효회수제거단편단,여pDNR-LIB재체진행련접,전전화도대장간균DH10B중,구건형성원시문고,진행적도측시화중조솔감정.결과표명원시문고적적도위3.17×105 cfu/ml,중조솔위86.3%,삽입편단다재500-2500bp간.수궤도선458개극륭측서,경분석획득94충이지기인급87충미지기인.기중포괄철결합단백(Felrritin)적전장cDNA서렬.해기인서렬전장895bp,5'-단비편마구위163bp,3'-비편마구위213bp,개방열독광위519bp,편마172개안기산.추측기단백분자량화등전점분별위20kDa화4.89.안기산서렬여추문반포、태평양모려、혈홍선두비、문창어、중화섬서、비주조섬、소가서이급인등적동원성유62%-82%.비대결과표명,철결합단백기인재동물진화중고도보수.
