江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
2期
364-368
,共5页
胡来根%廖俊伟%尹秀凤%刘大伟%毛火云%张小飞
鬍來根%廖俊偉%尹秀鳳%劉大偉%毛火雲%張小飛
호래근%료준위%윤수봉%류대위%모화운%장소비
Ⅰ型鸭肝炎病毒%VP1基因%重组杆状病毒%昆虫细胞%表达
Ⅰ型鴨肝炎病毒%VP1基因%重組桿狀病毒%昆蟲細胞%錶達
Ⅰ형압간염병독%VP1기인%중조간상병독%곤충세포%표체
根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP1基因.用限制性内切酶EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ消化VP1基因和转移载体pFastbac Ⅰ,在T4 DNA连接酶作用下将二者连接构建转移质粒pFastbac-VP1.经PCR、双酶切及测序鉴定后将其转化至含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10bac中,蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf 9,获得重组杆状病毒rvBac-VP1.SDS-PAGE分析结果表明,VP1基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物分子量约为2.7×104.Western-blot检测结果表明,表达产物能与抗DHV-Ⅰ阳性血清发生反应,具有良好的反应原性.
根據Ⅰ型鴨肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因組序列設計併閤成一對特異性引物,通過RT-PCR方法擴增DHV-Ⅰ(A66株)VP1基因.用限製性內切酶EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ消化VP1基因和轉移載體pFastbac Ⅰ,在T4 DNA連接酶作用下將二者連接構建轉移質粒pFastbac-VP1.經PCR、雙酶切及測序鑒定後將其轉化至含穿梭載體Bacmid的感受態細胞DH10bac中,藍白斑篩選穫得重組桿狀病毒穿梭質粒rBacmid-VP1,在脂質體的介導下轉染昆蟲細胞Sf 9,穫得重組桿狀病毒rvBac-VP1.SDS-PAGE分析結果錶明,VP1基因在昆蟲細胞中穫得錶達,錶達產物分子量約為2.7×104.Western-blot檢測結果錶明,錶達產物能與抗DHV-Ⅰ暘性血清髮生反應,具有良好的反應原性.
근거Ⅰ형압간염병독(DHV-Ⅰ)기인조서렬설계병합성일대특이성인물,통과RT-PCR방법확증DHV-Ⅰ(A66주)VP1기인.용한제성내절매EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ소화VP1기인화전이재체pFastbac Ⅰ,재T4 DNA련접매작용하장이자련접구건전이질립pFastbac-VP1.경PCR、쌍매절급측서감정후장기전화지함천사재체Bacmid적감수태세포DH10bac중,람백반사선획득중조간상병독천사질립rBacmid-VP1,재지질체적개도하전염곤충세포Sf 9,획득중조간상병독rvBac-VP1.SDS-PAGE분석결과표명,VP1기인재곤충세포중획득표체,표체산물분자량약위2.7×104.Western-blot검측결과표명,표체산물능여항DHV-Ⅰ양성혈청발생반응,구유량호적반응원성.
