江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
6期
59-62
,共4页
禽U6启动子%GFP%miRNA%细胞种属特异性
禽U6啟動子%GFP%miRNA%細胞種屬特異性
금U6계동자%GFP%miRNA%세포충속특이성
从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRNA表达后,根据转染细胞中GFP阳性细胞数及荧光强度变化,比较鸡U6启动子在哺乳动物源和禽源细胞中介导的miRNA沉默效率.结果显示,pRFPRNAiGFP在哺乳动物和禽源细胞中都能表达抑制性miRNA,但在禽源细胞中的基因沉默效率较高.因此,pRFPRNAiC可作为禽源细胞中表达miRNA的载体,GFP则是检测沉默效率的很好的报告基因,本研究为在禽源细胞中进行RNAi研究创建了平台.
從Genscript軟件預測的10箇GFP報告基因序列特異性miRNA中隨機選擇1箇,通過PCR法閤成相應雙鏈寡覈苷痠,插入含鷄U6啟動子的pRFPRNAiC載體,穫得pRFPRNAiGFP;將pRFPRNAiGFP與peGFP-N1共轉染COS-1、293-T、CEL和CEF細胞,在RT-PCR法確定miRNA錶達後,根據轉染細胞中GFP暘性細胞數及熒光彊度變化,比較鷄U6啟動子在哺乳動物源和禽源細胞中介導的miRNA沉默效率.結果顯示,pRFPRNAiGFP在哺乳動物和禽源細胞中都能錶達抑製性miRNA,但在禽源細胞中的基因沉默效率較高.因此,pRFPRNAiC可作為禽源細胞中錶達miRNA的載體,GFP則是檢測沉默效率的很好的報告基因,本研究為在禽源細胞中進行RNAi研究創建瞭平檯.
종Genscript연건예측적10개GFP보고기인서렬특이성miRNA중수궤선택1개,통과PCR법합성상응쌍련과핵감산,삽입함계U6계동자적pRFPRNAiC재체,획득pRFPRNAiGFP;장pRFPRNAiGFP여peGFP-N1공전염COS-1、293-T、CEL화CEF세포,재RT-PCR법학정miRNA표체후,근거전염세포중GFP양성세포수급형광강도변화,비교계U6계동자재포유동물원화금원세포중개도적miRNA침묵효솔.결과현시,pRFPRNAiGFP재포유동물화금원세포중도능표체억제성miRNA,단재금원세포중적기인침묵효솔교고.인차,pRFPRNAiC가작위금원세포중표체miRNA적재체,GFP칙시검측침묵효솔적흔호적보고기인,본연구위재금원세포중진행RNAi연구창건료평태.
