CAJ | 학술논문

本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱.以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5'UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量PCR(real-time PCR)检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性.结果,将克隆片段拼接得到长2 499 bp的大白猪SRPK1基因序列,包含了1 968 bp完整CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高.通过生物信息学方法预测所得5'UTR含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SPI MyoD、USF、FAT、p300,CP2、RREB-1、E2F和AP-1.利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达.SR-PK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低.5'UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关.
본연구지재천명저SRPK1기인적분자특점화표체보.이대백저위연구대상,이용RT-PCR기술극륭SRPK1기인CDS구역,동시이용반향PCR(inverse PCR,I-PCR)기술득도저부분SRPK1적5'UTR서렬;이용생물신식학방법분석SRPK1기인핵감산서렬급편마단백서렬적결구특점;이용형광정량PCR(real-time PCR)검측SRPK1재1화30일령대백저급두락극적심장、기육、비장、간장、신장、폐장、위、소장、대장、뇌적표체정황;구건저골격기손상모형,연구재골격기발육과정중SRPK1기인적표체특성.결과,장극륭편단병접득도장2 499 bp적대백저SRPK1기인서렬,포함료1 968 bp완정CDS구역,분석표명기편마함656개안기산적단백질;포괄2개P_Kc결구역,저SRPK1단백서렬여인화흑성성적상사성교고.통과생물신식학방법예측소득5'UTR함유다개전록결합위점:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SPI MyoD、USF、FAT、p300,CP2、RREB-1、E2F화AP-1.이용형광정량PCR연구발현,표체결과현시저해기인표체구유조직화충간특이성,주요도시재위、대장화소장중표체.SR-PK1기인재정개손상수복과정중적표체반복출현승고화강저.5'UTR처유다개화기육생장상관단백적전록결합위점,주요재소화계통조직표체,재골격기수복중표체상조,추측기가능여골격기세포발육혹기타기육생장상관인자적표체유관.