重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2011年
22期
2231-2233
,共3页
徐兰兰%游莉%郭元元%邹正渝%黎玉叶%孙双双%罗进勇%周兰
徐蘭蘭%遊莉%郭元元%鄒正渝%黎玉葉%孫雙雙%囉進勇%週蘭
서란란%유리%곽원원%추정투%려옥협%손쌍쌍%라진용%주란
钙粒蛋白B%腺病毒科%载体构建%鉴定
鈣粒蛋白B%腺病毒科%載體構建%鑒定
개립단백B%선병독과%재체구건%감정
目的 制备人S100A9(hS100A9)重组腺病毒载体,为进一步研究人S100A9蛋白的分子生物学作用奠定基础.方法 从pHAHA-hS100A9中PCR扩增hS100A9片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,获得重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9.酶切、聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后经PmeⅠ酶切电转入AdEasier感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A9,该质粒经PacⅠ酶切后由脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增重组腺病毒并进行滴度测定,最后通过PCR及蛋白印迹法(Western blot)鉴定重组腺病毒.结果 正确扩增出hS100A9基因;重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重组腺病毒质粒pAdhS100A9构建成功,并在HEK293细胞中成功包装且扩增后滴度为1 010 IU/mL;重组腺病毒AdhS100A9在HEK293细胞中成功转录和表达.结论 用pAdEasy系统成功构建hS100A9重组腺病毒载体,为探讨其生物学作用奠定了基础.
目的 製備人S100A9(hS100A9)重組腺病毒載體,為進一步研究人S100A9蛋白的分子生物學作用奠定基礎.方法 從pHAHA-hS100A9中PCR擴增hS100A9片段,亞剋隆至穿梭質粒pAdTrack-TOX,穫得重組穿梭質粒pAdTrack-TOX-hS100A9.酶切、聚閤酶鏈反應(PCR)及測序鑒定正確後經PmeⅠ酶切電轉入AdEasier感受態細胞,穫得重組腺病毒質粒pAdhS100A9,該質粒經PacⅠ酶切後由脂質體轉染至HEK293細胞中包裝擴增重組腺病毒併進行滴度測定,最後通過PCR及蛋白印跡法(Western blot)鑒定重組腺病毒.結果 正確擴增齣hS100A9基因;重組穿梭質粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重組腺病毒質粒pAdhS100A9構建成功,併在HEK293細胞中成功包裝且擴增後滴度為1 010 IU/mL;重組腺病毒AdhS100A9在HEK293細胞中成功轉錄和錶達.結論 用pAdEasy繫統成功構建hS100A9重組腺病毒載體,為探討其生物學作用奠定瞭基礎.
목적 제비인S100A9(hS100A9)중조선병독재체,위진일보연구인S100A9단백적분자생물학작용전정기출.방법 종pHAHA-hS100A9중PCR확증hS100A9편단,아극륭지천사질립pAdTrack-TOX,획득중조천사질립pAdTrack-TOX-hS100A9.매절、취합매련반응(PCR)급측서감정정학후경PmeⅠ매절전전입AdEasier감수태세포,획득중조선병독질립pAdhS100A9,해질립경PacⅠ매절후유지질체전염지HEK293세포중포장확증중조선병독병진행적도측정,최후통과PCR급단백인적법(Western blot)감정중조선병독.결과 정학확증출hS100A9기인;중조천사질립pAdTrack-TOX-hS100A9균급중조선병독질립pAdhS100A9구건성공,병재HEK293세포중성공포장차확증후적도위1 010 IU/mL;중조선병독AdhS100A9재HEK293세포중성공전록화표체.결론 용pAdEasy계통성공구건hS100A9중조선병독재체,위탐토기생물학작용전정료기출.
