中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2005年
3期
206-209
,共4页
张玲%翟俊辉%周冬生%郭兆彪%毕玉晶%王津%杨瑞馥
張玲%翟俊輝%週鼕生%郭兆彪%畢玉晶%王津%楊瑞馥
장령%적준휘%주동생%곽조표%필옥정%왕진%양서복
鼠疫耶尔森氏菌%荧光定量PCR,标识序列,LightCycler
鼠疫耶爾森氏菌%熒光定量PCR,標識序列,LightCycler
서역야이삼씨균%형광정량PCR,표식서렬,LightCycler
目的利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测.方法采用SYBR Green I随机掺入法,以Roche 试剂盒为标准,比较两公司的DNA聚合酶,用鼠疫菌31004建立荧光PCR反应体系;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物,检测其灵敏度和特异性,以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定275株鼠疫耶尔森氏菌,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度.结果建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系;EV76的检测灵敏度可达每反应体系1.6个菌;检测我国18个生态型共计275株鼠疫耶尔森氏菌及28株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果,28株对照菌株均为阴性;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系4 000个菌.结论该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测.
目的利用LightCycler建立一種簡便、特異的熒光定量PCR檢測方法,用于鼠疫耶爾森氏菌的快速檢測.方法採用SYBR Green I隨機摻入法,以Roche 試劑盒為標準,比較兩公司的DNA聚閤酶,用鼠疫菌31004建立熒光PCR反應體繫;針對鼠疫耶爾森氏菌特異的染色體標識序列和質粒上F1抗原基因設計引物,檢測其靈敏度和特異性,以盲測試驗進行驗證;在此基礎上鑒定275株鼠疫耶爾森氏菌,併測試該法檢測髒器汙染模擬標本的靈敏度.結果建立以一箇公司試劑為主較低成本的PCR反應體繫;EV76的檢測靈敏度可達每反應體繫1.6箇菌;檢測我國18箇生態型共計275株鼠疫耶爾森氏菌及28株非鼠疫菌株的PCR擴增結果錶明,鼠疫菌株均齣現特異的擴增結果,28株對照菌株均為陰性;肝、脾、肺模擬標本檢測靈敏度可達每反應體繫4 000箇菌.結論該方法對于檢測鼠疫耶爾森氏菌具有簡便、快捷、高敏感性和特異性的特點,適用于鼠疫緊急疫情時的快速診斷和疫源地鑑測.
목적이용LightCycler건립일충간편、특이적형광정량PCR검측방법,용우서역야이삼씨균적쾌속검측.방법채용SYBR Green I수궤참입법,이Roche 시제합위표준,비교량공사적DNA취합매,용서역균31004건립형광PCR반응체계;침대서역야이삼씨균특이적염색체표식서렬화질립상F1항원기인설계인물,검측기령민도화특이성,이맹측시험진행험증;재차기출상감정275주서역야이삼씨균,병측시해법검측장기오염모의표본적령민도.결과건립이일개공사시제위주교저성본적PCR반응체계;EV76적검측령민도가체매반응체계1.6개균;검측아국18개생태형공계275주서역야이삼씨균급28주비서역균주적PCR확증결과표명,서역균주균출현특이적확증결과,28주대조균주균위음성;간、비、폐모의표본검측령민도가체매반응체계4 000개균.결론해방법대우검측서역야이삼씨균구유간편、쾌첩、고민감성화특이성적특점,괄용우서역긴급역정시적쾌속진단화역원지감측.
