CAJ | 학술논문

目的:研究化疗药物依托泊苷对腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内表达水平的影响.方法: 携带外源基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-EGFP(MOI为1或10)单独或联合终质量浓度为0.2、2、20、40、80、100和200 μg/ml的依托泊苷感染体外培养的肿瘤细胞NCI-H446(人非小细胞肺癌细胞株)、A549(人肺腺癌细胞株)、SMMC-7721(人肝癌细胞株)、SGC7901(人胃癌细胞株)、SKBR-3(人乳腺癌细胞株)和BTT(小鼠膀胱移行上皮癌细胞株)后不同时间,流式细胞仪分析肿瘤细胞EGFP阳性率和平均荧光强度,Western blotting检测EGFP蛋白表达,RT-PCR和实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞内EGFP的mRNA表达量和DNA拷贝数.结果: 不同剂量的依托泊苷可不同程度地提高Ad5-CMV-EGFP在7种肿瘤细胞内的表达水平,但对EGFP阳性率无明显提高.10 MOI的Ad5-CMV-EGFP联合40 μg/ml依托泊苷分别感染肿瘤细胞NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SKBR-3和BTT 24 h后,细胞内EGFP的荧光强度分别是单独感染的3.3、3.5、3.1、6.2、7.0、5.4和3.4倍.Ad5-CMV-EGFP联合应用依托泊苷后肿瘤细胞内EGFP蛋白表达增加2～5倍,EGFP mRNA表达量提高,但DNA拷贝数未见明显改变.结论: 依托泊苷可提高腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内的表达水平,该作用可能是在转录水平上发挥作用的.
목적:연구화료약물의탁박감대선병독재체개도적외원기인재종류세포내표체수평적영향.방법: 휴대외원기인증강형록색형광단백(EGFP)적복제결함형선병독Ad5-CMV-EGFP(MOI위1혹10)단독혹연합종질량농도위0.2、2、20、40、80、100화200 μg/ml적의탁박감감염체외배양적종류세포NCI-H446(인비소세포폐암세포주)、A549(인폐선암세포주)、SMMC-7721(인간암세포주)、SGC7901(인위암세포주)、SKBR-3(인유선암세포주)화BTT(소서방광이행상피암세포주)후불동시간,류식세포의분석종류세포EGFP양성솔화평균형광강도,Western blotting검측EGFP단백표체,RT-PCR화실시형광정량PCR검측종류세포내EGFP적mRNA표체량화DNA고패수.결과: 불동제량적의탁박감가불동정도지제고Ad5-CMV-EGFP재7충종류세포내적표체수평,단대EGFP양성솔무명현제고.10 MOI적Ad5-CMV-EGFP연합40 μg/ml의탁박감분별감염종류세포NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SKBR-3화BTT 24 h후,세포내EGFP적형광강도분별시단독감염적3.3、3.5、3.1、6.2、7.0、5.4화3.4배.Ad5-CMV-EGFP연합응용의탁박감후종류세포내EGFP단백표체증가2～5배,EGFP mRNA표체량제고,단DNA고패수미견명현개변.결론: 의탁박감가제고선병독재체개도적외원기인재종류세포내적표체수평,해작용가능시재전록수평상발휘작용적.