癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2007年
1期
32-37
,共6页
徐可树%王华枫%钱伟%汪步海
徐可樹%王華楓%錢偉%汪步海
서가수%왕화풍%전위%왕보해
短发夹状RNA%COX-2%肝肿瘤%粘附%侵袭
短髮夾狀RNA%COX-2%肝腫瘤%粘附%侵襲
단발협상RNA%COX-2%간종류%점부%침습
背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达,参与肝癌的发生发展.本研究探讨COX-2短发夹状RNA(shrt hairpin RNA,shRNA)对人肝癌细胞株HepG2中COX-2表达及细胞粘附侵袭力的影响.方法:以人COX-2 mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,分别构建两个以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体转染HepG2细胞,分别观察转染后24 h、48 h、72 h和96 h COX-2 mRNA和蛋白表达的变化,检测抑制效果.MTT法观察HepG2细胞与Matrigel胶粘附性的变化.Transwell小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HepG2细胞体外侵袭力的变化.结果:质粒在HepG2细胞的转染率约为60%.质粒WBH1导人细胞24 h、48 h、72 h和96 h后,COX-2mRNA表达抑制率分别为18.5%、88.6%、52.8%和42.4%(P＜0.01),蛋白表达抑制率分别为10.3%、80.5%、45.3%和39.0%(P＜0.01).转染WBH2质粒的HepG2细胞COX-2表达无明显变化(P＞0.05).转染后48 h,转染WBH1质粒的HepG2细胞与Matrigel胶的粘附率为(6.0±0.4)%,与空白对照组(11.4±0.2)%相比明显下降(P＜0.01),抑制率为47.4%.转染WBH1质粒的细胞穿膜数为(8.2±1.5),与空白对照组(22.8±1.7)相比有显著性差异(P＜0.01),抑制率为63.7%.转染WBH2质粒的HepG2细胞粘附率和穿膜细胞数均无明显变化(P＞0.05).结论:shRNA真核表达载体明显干扰HepG2细胞的COX-2表达,能有效抑制HepG2细胞的体外粘附侵袭力.
揹景與目的:環氧閤酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌組織中呈高錶達,參與肝癌的髮生髮展.本研究探討COX-2短髮夾狀RNA(shrt hairpin RNA,shRNA)對人肝癌細胞株HepG2中COX-2錶達及細胞粘附侵襲力的影響.方法:以人COX-2 mRNA編碼區中兩條不同序列作為RNA榦擾靶點,分彆構建兩箇以綠色熒光蛋白GFP為報告基因的shRNA真覈錶達載體質粒WBH1和WBH2,應用暘離子脂質體轉染HepG2細胞,分彆觀察轉染後24 h、48 h、72 h和96 h COX-2 mRNA和蛋白錶達的變化,檢測抑製效果.MTT法觀察HepG2細胞與Matrigel膠粘附性的變化.Transwell小室實驗以穿過人工基底膜的細胞數量評估HepG2細胞體外侵襲力的變化.結果:質粒在HepG2細胞的轉染率約為60%.質粒WBH1導人細胞24 h、48 h、72 h和96 h後,COX-2mRNA錶達抑製率分彆為18.5%、88.6%、52.8%和42.4%(P＜0.01),蛋白錶達抑製率分彆為10.3%、80.5%、45.3%和39.0%(P＜0.01).轉染WBH2質粒的HepG2細胞COX-2錶達無明顯變化(P＞0.05).轉染後48 h,轉染WBH1質粒的HepG2細胞與Matrigel膠的粘附率為(6.0±0.4)%,與空白對照組(11.4±0.2)%相比明顯下降(P＜0.01),抑製率為47.4%.轉染WBH1質粒的細胞穿膜數為(8.2±1.5),與空白對照組(22.8±1.7)相比有顯著性差異(P＜0.01),抑製率為63.7%.轉染WBH2質粒的HepG2細胞粘附率和穿膜細胞數均無明顯變化(P＞0.05).結論:shRNA真覈錶達載體明顯榦擾HepG2細胞的COX-2錶達,能有效抑製HepG2細胞的體外粘附侵襲力.
배경여목적:배양합매-2(cyclooxygenase-2,COX-2)재간암조직중정고표체,삼여간암적발생발전.본연구탐토COX-2단발협상RNA(shrt hairpin RNA,shRNA)대인간암세포주HepG2중COX-2표체급세포점부침습력적영향.방법:이인COX-2 mRNA편마구중량조불동서렬작위RNA간우파점,분별구건량개이록색형광단백GFP위보고기인적shRNA진핵표체재체질립WBH1화WBH2,응용양리자지질체전염HepG2세포,분별관찰전염후24 h、48 h、72 h화96 h COX-2 mRNA화단백표체적변화,검측억제효과.MTT법관찰HepG2세포여Matrigel효점부성적변화.Transwell소실실험이천과인공기저막적세포수량평고HepG2세포체외침습력적변화.결과:질립재HepG2세포적전염솔약위60%.질립WBH1도인세포24 h、48 h、72 h화96 h후,COX-2mRNA표체억제솔분별위18.5%、88.6%、52.8%화42.4%(P＜0.01),단백표체억제솔분별위10.3%、80.5%、45.3%화39.0%(P＜0.01).전염WBH2질립적HepG2세포COX-2표체무명현변화(P＞0.05).전염후48 h,전염WBH1질립적HepG2세포여Matrigel효적점부솔위(6.0±0.4)%,여공백대조조(11.4±0.2)%상비명현하강(P＜0.01),억제솔위47.4%.전염WBH1질립적세포천막수위(8.2±1.5),여공백대조조(22.8±1.7)상비유현저성차이(P＜0.01),억제솔위63.7%.전염WBH2질립적HepG2세포점부솔화천막세포수균무명현변화(P＞0.05).결론:shRNA진핵표체재체명현간우HepG2세포적COX-2표체,능유효억제HepG2세포적체외점부침습력.
