新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2008年
1期
56-60
,共5页
王博%艾秀莲%王志方%李芳%罗明
王博%艾秀蓮%王誌方%李芳%囉明
왕박%애수련%왕지방%리방%라명
新疆雪莲%cDNA文库%λTripLEx2%表达序列标签
新疆雪蓮%cDNA文庫%λTripLEx2%錶達序列標籤
신강설련%cDNA문고%λTripLEx2%표체서렬표첨
以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTM cDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA , 用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链.通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA .将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上, 并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库.经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL).随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上.将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据.其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性.这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息.
以野生新疆雪蓮(Saussurea involucrata Kar.et Kit)為研究材料,利用Creator SMARTTM cDNA Library Construction技術構建瞭雪蓮全長cDNA文庫,從野生雪蓮中提取總RNA和mRNA , 用分離到的微量mRNA閤成cDNA第1鏈.通過長距離PCR擴增得到足夠量的雙鏈cDNA .將SfiⅠ酶切後併純化的cDNA片段連接到經SfiⅠ酶切的噬菌體λTripIEX2上, 併對噬菌體進行包裝,建成cDNA的全長庫.經大腸桿菌XL1-Blue平闆檢測,原始文庫滴度達4.03×107(pfu/mL).隨機挑選500箇剋隆進行序列測定,PCR鑒定結果顯示多數插入片段均在500 bp以上.將所測序列經GenBank檢索和生物信息學比較,共有56箇序列為非冗餘數據.其中有14箇cDNA片段序列在GenBank上無明顯的同源性,42箇片段與已報道的基因有較高的同源性.這些EST數據為進一步篩選和剋隆雪蓮特異性錶達基因提供瞭材料平檯,為雪蓮基因組數據增補瞭大量信息.
이야생신강설련(Saussurea involucrata Kar.et Kit)위연구재료,이용Creator SMARTTM cDNA Library Construction기술구건료설련전장cDNA문고,종야생설련중제취총RNA화mRNA , 용분리도적미량mRNA합성cDNA제1련.통과장거리PCR확증득도족구량적쌍련cDNA .장SfiⅠ매절후병순화적cDNA편단련접도경SfiⅠ매절적서균체λTripIEX2상, 병대서균체진행포장,건성cDNA적전장고.경대장간균XL1-Blue평판검측,원시문고적도체4.03×107(pfu/mL).수궤도선500개극륭진행서렬측정,PCR감정결과현시다수삽입편단균재500 bp이상.장소측서렬경GenBank검색화생물신식학비교,공유56개서렬위비용여수거.기중유14개cDNA편단서렬재GenBank상무명현적동원성,42개편단여이보도적기인유교고적동원성.저사EST수거위진일보사선화극륭설련특이성표체기인제공료재료평태,위설련기인조수거증보료대량신식.
