CAJ | 학술논문

背景:目前国内对上皮细胞的研究多采用细胞株的方式,但其离体时间长,细胞易产生变异,而原代培养则与体内状态更相近,希望能为组织工程肾脏相关研究提供肾上皮细胞来源.目的:探索原代肾上皮细胞培养的条件和方法.建立一套高效快捷的原代肾上皮细胞培养方案.设计、时间及地点:单一样本观察,开放性实验,于2007-12/2008-03在武汉大学病毒学国家重点实验室分子病毒与癌研究室完成.材料:新生2-4 d SPF级雄性SD大鼠鼠婴12只.方法:取SD大鼠,切取双侧肾脏组织,将其反复剪成约1 mm×1 mm×1 mm块,加入2.5 g/L的胰酶和0.4 g/L乙二胺四乙酸,放入37℃恒温水浴箱消化,30 min后移至200目钢网过滤,去除未消化组织块和细胞团,收集网下悬液1 000 dmin低温离心5 min,用DMEM(pH 7.2)培养基制成细胞悬液,以4×108L-1密度接种于培养瓶中,置CO2培养箱中培养.再将细胞悬液接种到一个培养瓶内,静止培养30min,镜下观察细胞部分贴壁,将培养液连同尚未J贴壁细胞一起吸到另一瓶内,继续培养,重复上述操作一次,纯化肾上皮细胞.主要观察指标:以4×108L-1密度接种于培养瓶中培养.用4 g/L锥虫蓝染色榆测肾上皮细胞的存活率,不着色者为存活细胞.并观察肾上皮细胞的形态学变化、贴壁率.结果:肾上皮细胞存活率为95.20%,4 h约60%的细胞贴壁,12 h 85%以上的细胞已经贴壁.24 h后肾上皮细胞伸出伪足呈梭形、多角形,具有胞核一两个,细胞大小均匀,生长迅速,三四天后形成细胞簇,最后肾上皮细胞连接成片生长.结论:该肾上皮细胞培养方法存活率、贴壁率高,是一种可靠的肾上皮细胞培养方法.
배경:목전국내대상피세포적연구다채용세포주적방식,단기리체시간장,세포역산생변이,이원대배양칙여체내상태경상근,희망능위조직공정신장상관연구제공신상피세포래원.목적:탐색원대신상피세포배양적조건화방법.건립일투고효쾌첩적원대신상피세포배양방안.설계、시간급지점:단일양본관찰,개방성실험,우2007-12/2008-03재무한대학병독학국가중점실험실분자병독여암연구실완성.재료:신생2-4 d SPF급웅성SD대서서영12지.방법:취SD대서,절취쌍측신장조직,장기반복전성약1 mm×1 mm×1 mm괴,가입2.5 g/L적이매화0.4 g/L을이알사을산,방입37℃항온수욕상소화,30 min후이지200목강망과려,거제미소화조직괴화세포단,수집망하현액1 000 dmin저온리심5 min,용DMEM(pH 7.2)배양기제성세포현액,이4×108L-1밀도접충우배양병중,치CO2배양상중배양.재장세포현액접충도일개배양병내,정지배양30min,경하관찰세포부분첩벽,장배양액련동상미J첩벽세포일기흡도령일병내,계속배양,중복상술조작일차,순화신상피세포.주요관찰지표:이4×108L-1밀도접충우배양병중배양.용4 g/L추충람염색유측신상피세포적존활솔,불착색자위존활세포.병관찰신상피세포적형태학변화、첩벽솔.결과:신상피세포존활솔위95.20%,4 h약60%적세포첩벽,12 h 85%이상적세포이경첩벽.24 h후신상피세포신출위족정사형、다각형,구유포핵일량개,세포대소균균,생장신속,삼사천후형성세포족,최후신상피세포련접성편생장.결론:해신상피세포배양방법존활솔、첩벽솔고,시일충가고적신상피세포배양방법.