安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
1期
48-52
,共5页
周明%罗以勤%姚丽娟%赵亮%董行%聂江玲%吴双正%胡闻
週明%囉以勤%姚麗娟%趙亮%董行%聶江玲%吳雙正%鬍聞
주명%라이근%요려연%조량%동행%섭강령%오쌍정%호문
肺癌%基因表达%Ⅳ型胶原α3链
肺癌%基因錶達%Ⅳ型膠原α3鏈
폐암%기인표체%Ⅳ형효원α3련
目的 利用Taqman技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,对肺癌组织中Ⅳ型胶原α3链[α3 (Ⅳ)] mRNA表达进行定量及蛋白表达水平检测,评价其临床应用价值.方法 在α3(Ⅳ)基因NC1结构域编码序列设计一对引物和一条Taqman探针;优化反应体系的条件,以不同质粒DNA含量为标准品和其循环阈值(Ct值)制作标准曲线,检测肺癌组织中α3(Ⅳ) mRNA含量;并对本方法进行方法学评价.Western blot法检测tumstatin蛋白表达情况.结果 成功建立了α3(Ⅳ)基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度为800 拷贝/μl;在10.3～10.8 拷贝/μl之间与Ct值具有很好的线性关系;PCR扩增效率为99 4%;肺癌组织中α3(Ⅳ) mRNA表达定量检测发现,48例肺癌患者肺癌组织α3(Ⅳ) mRNA组含量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.01）,肺癌组织中tumstatin蛋白表达下调/缺失率显著高于癌旁组织（P<0.01）.临床监测发现肺癌患者癌组织α3(Ⅳ) mRNA含量检测和TNM分期程度具有相关性(P<0.05).结论 α3(Ⅳ)与肺癌的发生发展关系密切,FQ-RT-PCR检测α3(Ⅳ) mRNA的表达为肺癌转移、预后判断、临床治疗等奠定良好基础.
目的 利用Taqman技術,建立熒光定量逆轉錄聚閤酶鏈反應(FQ-RT-PCR)方法,對肺癌組織中Ⅳ型膠原α3鏈[α3 (Ⅳ)] mRNA錶達進行定量及蛋白錶達水平檢測,評價其臨床應用價值.方法 在α3(Ⅳ)基因NC1結構域編碼序列設計一對引物和一條Taqman探針;優化反應體繫的條件,以不同質粒DNA含量為標準品和其循環閾值(Ct值)製作標準麯線,檢測肺癌組織中α3(Ⅳ) mRNA含量;併對本方法進行方法學評價.Western blot法檢測tumstatin蛋白錶達情況.結果 成功建立瞭α3(Ⅳ)基因mRNA錶達實時熒光定量PCR檢測方法,檢測靈敏度為800 拷貝/μl;在10.3～10.8 拷貝/μl之間與Ct值具有很好的線性關繫;PCR擴增效率為99 4%;肺癌組織中α3(Ⅳ) mRNA錶達定量檢測髮現,48例肺癌患者肺癌組織α3(Ⅳ) mRNA組含量顯著低于癌徬組織,差異有統計學意義（P<0.01）,肺癌組織中tumstatin蛋白錶達下調/缺失率顯著高于癌徬組織（P<0.01）.臨床鑑測髮現肺癌患者癌組織α3(Ⅳ) mRNA含量檢測和TNM分期程度具有相關性(P<0.05).結論 α3(Ⅳ)與肺癌的髮生髮展關繫密切,FQ-RT-PCR檢測α3(Ⅳ) mRNA的錶達為肺癌轉移、預後判斷、臨床治療等奠定良好基礎.
목적 이용Taqman기술,건립형광정량역전록취합매련반응(FQ-RT-PCR)방법,대폐암조직중Ⅳ형효원α3련[α3 (Ⅳ)] mRNA표체진행정량급단백표체수평검측,평개기림상응용개치.방법 재α3(Ⅳ)기인NC1결구역편마서렬설계일대인물화일조Taqman탐침;우화반응체계적조건,이불동질립DNA함량위표준품화기순배역치(Ct치)제작표준곡선,검측폐암조직중α3(Ⅳ) mRNA함량;병대본방법진행방법학평개.Western blot법검측tumstatin단백표체정황.결과 성공건립료α3(Ⅳ)기인mRNA표체실시형광정량PCR검측방법,검측령민도위800 고패/μl;재10.3～10.8 고패/μl지간여Ct치구유흔호적선성관계;PCR확증효솔위99 4%;폐암조직중α3(Ⅳ) mRNA표체정량검측발현,48례폐암환자폐암조직α3(Ⅳ) mRNA조함량현저저우암방조직,차이유통계학의의（P<0.01）,폐암조직중tumstatin단백표체하조/결실솔현저고우암방조직（P<0.01）.림상감측발현폐암환자암조직α3(Ⅳ) mRNA함량검측화TNM분기정도구유상관성(P<0.05).결론 α3(Ⅳ)여폐암적발생발전관계밀절,FQ-RT-PCR검측α3(Ⅳ) mRNA적표체위폐암전이、예후판단、림상치료등전정량호기출.
